การทดสอบซิเตรตเป็นการตรวจจับความสามารถของสิ่งมีชีวิตในการใช้ซิเตรตเป็นแหล่งคาร์บอนและพลังงานเพียงอย่างเดียว

แบคทีเรียจะถูกเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีโซเดียมซิเตรตและสารบ่งชี้ค่า pHเช่นโบรโมไทมอลบลูอาหารเลี้ยงเชื้อนี้ยังประกอบด้วยเกลือแอมโมเนียมอนินทรีย์ ซึ่งใช้เป็นแหล่งไนโตรเจนเพียงอย่างเดียว การใช้ซิเตรตเกี่ยวข้องกับเอนไซม์ซิเตรตไลเอส ซึ่งจะย่อยสลายซิเตรตเป็นออกซาโลอะซิเตตและอะซิเตต ออกซาโลอะซิเตต จะถูกย่อยสลายต่อไปเป็นไพรูเวตและคาร์บอนไดออกไซด์ (CO2 ₎การผลิตโซเดียมไบคาร์บอเนต (NaHCO3 ₎และแอมโมเนีย (NH3 ₎จากการใช้โซเดียมซิเตรตและเกลือแอมโมเนียมส่งผลให้ค่า pH เป็นด่าง ซึ่งส่งผลให้สีของอาหารเลี้ยงเชื้อเปลี่ยนจากสีเขียว (เป็นกลาง) เป็นสีน้ำเงิน (เป็นด่าง)

คัดแยกโคโลนีของแบคทีเรียจากลวดตรงและนำไปเพาะในวุ้นซิเตรตของซิมมอนส์แล้วบ่มค้างคืนที่อุณหภูมิ 37 °C ไม่แนะนำให้เพาะเชื้อจากน้ำซุปเพราะเชื้อจะหนักเกินไป หากจุลินทรีย์สามารถใช้ซิเตรตได้ สีของอาหารเลี้ยงเชื้อมักจะเปลี่ยนจากสีเขียวเป็นสีน้ำเงิน แม้ว่าการเจริญเติบโตบนอาหารเลี้ยงเชื้อแม้ไม่มีการเปลี่ยนสีก็ถือว่าเป็นผลบวก^{[ 1 ]}การสังเกตว่าไม่มีการเจริญเติบโตถือเป็นผลลบ

ราอูลเทลลา แพลนติโคลา

โปรทีอุสไมโซฟาเซียนส์

แบคทีเรียสองชนิด (ทั้งคู่เป็นแบคทีเรียในวงศ์ Enterobacteriaceae ) บนอาหารเลี้ยงเชื้อซิเตรต แสดง ผล บวก (ด้านซ้าย) และ ผล ลบ (ด้านขวา) สำหรับการทดสอบซิเตรต

ตัวอย่าง:

• เชื้อเอสเชอริเชีย โคไล : ผลเป็นลบ
• เชื้อ Klebsiella pneumoniae : ผลตรวจเป็นบวก
• Frateuria aurantia : ผลบวก