การทดสอบที่เลือกใช้ในการคัดกรองเลือดและเนื้อเยื่อของผู้บริจาคต้องมีความมั่นใจสูงว่าจะตรวจพบเชื้อ HIV ได้หากมีอยู่ (กล่าวคือต้องมีความไว สูง) ธนาคารเลือดในประเทศตะวันตกใช้การทดสอบ แบบผสมผสานระหว่าง แอนติบอดีแอนติเจนและ กรด นิวคลีอิกองค์การอนามัยโลกประมาณการว่าณ ปี 2000การตรวจคัดกรองเลือดที่ไม่เพียงพอ ส่งผลให้มีผู้ติดเชื้อ HIV รายใหม่ทั่วโลกกว่า 1 ล้านคน

ในสหรัฐอเมริกา องค์การอาหารและยา (FDA) กำหนดให้เลือดที่บริจาคทั้งหมดต้องได้รับการตรวจคัดกรองโรคติดเชื้อหลายชนิด รวมถึง HIV-1 และ HIV-2 โดยใช้การทดสอบแอนติบอดี ( EIA ) ร่วมกับการทดสอบกรดนิวคลีอิก (NAT) ที่รวดเร็วกว่า^{[ 4 ] [ 5 ]}การทดสอบวินิจฉัยเหล่านี้ควบคู่ไปกับการคัดเลือกผู้บริจาคอย่างระมัดระวังตั้งแต่ปี 2001ความเสี่ยงของการติดเชื้อ HIV จากการถ่ายเลือดในสหรัฐอเมริกาอยู่ที่ประมาณ 1 ใน 2.5 ล้านต่อการถ่ายเลือดแต่ละครั้ง^{[ 6 ]}

การทดสอบที่ใช้ในการวินิจฉัยการติดเชื้อเอชไอวีในบุคคลใดบุคคลหนึ่งนั้น จำเป็นต้องมีความไวและความจำเพาะ สูง ในสหรัฐอเมริกา วิธีการนี้ทำได้โดยใช้อัลกอริทึมที่รวมการทดสอบแอนติบอดีเอชไอวีสองวิธีเข้าด้วยกัน หากตรวจพบแอนติบอดีจากการทดสอบเบื้องต้นโดยใช้ วิธี ELISAการทดสอบครั้งที่สองโดยใช้ กระบวนการ เวสเทิร์นบลอตจะกำหนดขนาดของแอนติเจนในชุดทดสอบที่จับกับแอนติบอดี การรวมกันของสองวิธีนี้มีความแม่นยำสูง

นโยบายของ UNAIDS/WHO เกี่ยวกับการตรวจหาเชื้อ HIV ระบุว่าเงื่อนไขในการตรวจหาเชื้อ HIV จะต้องยึด หลัก สิทธิมนุษยชนที่ให้ความเคารพต่อหลักจริยธรรม [ ^{7 ] ตาม}หลักการเหล่านี้ การดำเนินการตรวจหาเชื้อ HIV ของบุคคลจะต้องเป็นไปตาม

• เป็นความลับ ;
• พร้อมกับการให้คำปรึกษา (สำหรับผู้ที่มีผลตรวจเป็นบวก)
• ดำเนินการโดยได้รับความยินยอมจากผู้เข้ารับการทดสอบแล้ว

มีข้อโต้แย้งมากมายเกี่ยวกับภาระผูกพันทางจริยธรรมของผู้ให้บริการด้านการดูแลสุขภาพในการแจ้งให้คู่รักทางเพศของผู้ติดเชื้อเอชไอวีทราบว่าพวกเขามีความเสี่ยงที่จะติดเชื้อไวรัส^{[ 8 ]} เขตอำนาจทางกฎหมายบางแห่งอนุญาตให้เปิดเผยข้อมูลดังกล่าว ในขณะที่บางแห่งไม่อนุญาต ปัจจุบันสถานที่ตรวจที่ได้รับทุนจากรัฐหลายแห่งใช้รูปแบบการตรวจแบบเป็นความลับ ซึ่งช่วยให้สามารถติดตามผู้ติดเชื้อได้ง่ายกว่าการตรวจแบบไม่ระบุชื่อซึ่งมีหมายเลขกำกับผลการตรวจที่เป็นบวก มีข้อโต้แย้งเกี่ยวกับประเด็นความเป็นส่วนตัว

ในประเทศกำลังพัฒนา การตรวจและให้คำปรึกษาเกี่ยวกับเอชไอวีที่บ้าน (HBHTC) เป็นแนวทางใหม่ที่กำลังเกิดขึ้นเพื่อแก้ไขปัญหาเรื่องการรักษาความลับ HBHTC ช่วยให้บุคคล คู่รัก และครอบครัวสามารถทราบสถานะการติดเชื้อเอชไอวีได้อย่างสะดวกสบายและเป็นส่วนตัวในสภาพแวดล้อมที่บ้าน โดยส่วนใหญ่จะใช้การตรวจเอชไอวีแบบรวดเร็ว ซึ่งผลลัพธ์จะพร้อมให้ผู้รับบริการทราบภายใน 15 ถึง 30 นาที นอกจากนี้ เมื่อแจ้งผลตรวจเอชไอวีเป็นบวก ผู้ให้บริการ HTC สามารถเสนอการเชื่อมโยงที่เหมาะสมสำหรับการป้องกัน การดูแล และการรักษาได้^{[ 9 ]}

การทดสอบแบบไม่เปิดเผยชื่ออาจมีให้บริการสำหรับผู้ที่ต้องการตรวจหาเชื้อเอชไอวีโดยไม่ต้องระบุชื่อ แทนที่จะระบุชื่อ ผู้ที่เข้ารับการทดสอบจะได้รับหมายเลข จากนั้นจึงแสดงหมายเลขนั้นเพื่อรับผลการทดสอบ ซึ่งผลการทดสอบจะไม่ระบุชื่อของบุคคลนั้น^{[ 10 ]}

ในสหรัฐอเมริกามาตรฐานการดูแล ที่กำลังเกิดขึ้นอย่างหนึ่ง คือการตรวจคัดกรองผู้ป่วยทุกคนเพื่อหาเชื้อ HIV ในสถานพยาบาลทุกแห่ง^{[ 11 ]} ในปี 2549 ศูนย์ควบคุมและป้องกันโรค (CDC) ได้ประกาศโครงการริเริ่มสำหรับการตรวจหาเชื้อ HIV เป็นประจำโดยสมัครใจสำหรับชาวอเมริกันทุกคนที่มีอายุ 13-64 ปี ในระหว่างการเข้ารับการรักษาพยาบาล คาดว่า 25% ของผู้ติดเชื้อไม่ทราบสถานะของตนเอง หากโครงการนี้ประสบความสำเร็จ คาดว่าจะช่วยลดการติดเชื้อใหม่ได้ 30% ต่อปี^{[ 12 ]} CDC แนะนำให้ยกเลิกข้อกำหนดสำหรับการยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรหรือการให้คำปรึกษาก่อนการตรวจอย่างละเอียดถี่ถ้วน เนื่องจากเป็นอุปสรรคต่อการตรวจหาเชื้อเป็นประจำในวงกว้าง^{[ 12 ]}ในปี 2549 สมาคมศูนย์สุขภาพชุมชนแห่งชาติได้นำรูปแบบการตรวจหาเชื้อ HIV อย่างรวดเร็วและฟรีมาใช้กับผู้ป่วยทุกคนที่มีอายุระหว่าง 13 ถึง 64 ปี ในระหว่างการเข้ารับการตรวจสุขภาพและทันตกรรมเบื้องต้นตามปกติ โครงการนี้ช่วยเพิ่มอัตราการตรวจหาเชื้อ โดย 66% ของผู้ป่วย 17,237 รายที่เข้าร่วมในการศึกษาตกลงที่จะเข้ารับการตรวจ (56% ได้รับการตรวจเป็นครั้งแรก) ^{[ 13 ]}ในเดือนกันยายน พ.ศ. 2553 นิวยอร์กกลายเป็นรัฐแรกที่กำหนดให้โรงพยาบาลและผู้ให้บริการดูแลสุขภาพเบื้องต้นต้องเสนอการตรวจหาเชื้อเอชไอวีแก่ผู้ป่วยทุกคนที่มีอายุระหว่าง 13 ถึง 64 ปี การประเมินผลกระทบของกฎหมายพบว่ากฎหมายดังกล่าวทำให้การตรวจเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญทั่วทั้งรัฐ^{[ 14 ]}

การทดสอบแอนติบอดีอาจให้ ผล ลบเท็จ (ตรวจไม่พบแอนติบอดีแม้จะมีเชื้อ HIV อยู่) ในช่วงระยะเวลาแฝงดังนั้นจึงมีการกำหนดช่วงเวลา 3 สัปดาห์ถึง 6 เดือนระหว่างเวลาที่สัมผัสกับเชื้อ HIV และการสร้างแอนติบอดีที่วัดได้เพื่อ ยืนยัน การเปลี่ยนแปลงทางซีรัมวิทยา ของ HIV คนส่วนใหญ่จะสร้างแอนติบอดีที่ตรวจพบได้ประมาณ 18 ถึง 30 วันหลังจากการสัมผัสเชื้อ แม้ว่าบางคนอาจเปลี่ยนแปลงทางซีรัมวิทยาในภายหลังก็ตาม คนส่วนใหญ่ (99%) มีแอนติบอดีที่ตรวจพบได้ภายใน 2 เดือนหลังจากการสัมผัสเชื้อ HIV ^{[ 3 ]}

ในช่วงระยะเวลาแฝง ผู้ติดเชื้อสามารถแพร่เชื้อ HIV ไปสู่ผู้อื่นได้ แม้ว่าการติดเชื้อ HIV ของพวกเขาอาจตรวจไม่พบด้วยการทดสอบแอนติบอดีการรักษาด้วยยาต้าน ไวรัส ในช่วงระยะเวลาแฝงสามารถชะลอการสร้างแอนติบอดีและขยายระยะเวลาแฝงออกไปเกิน 12 เดือน^{[ 15 ]}ซึ่งไม่เป็นเช่นนั้นกับผู้ป่วยที่ได้รับการรักษาด้วยยาป้องกันหลังสัมผัสเชื้อ (PEP) ผู้ป่วยเหล่านั้นต้องเข้ารับการทดสอบ ELISA ในช่วงเวลาต่างๆ หลังจากการรักษาตามปกติ 28 วัน ซึ่งบางครั้งอาจขยายออกไปนอกระยะเวลาแฝงแบบอนุรักษ์นิยมที่ 6 เดือน

การทดสอบอิมมูโนแอสเซย์แบบเอนไซม์เชื่อมโยง (ELISA) หรือ การทดสอบ อิมมูโนแอสเซย์แบบเอนไซม์ (EIA) เป็นการทดสอบคัดกรองชนิดแรกที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการตรวจหาเชื้อ HIV ซึ่งมีความไวสูง

ในการทดสอบ ELISA เซรั่มของบุคคลจะถูกเจือจาง 400 เท่าและนำไปใส่ในจานที่มีแอนติเจนของเชื้อ HIV ติดอยู่ หากมีแอนติบอดีต่อเชื้อ HIV อยู่ในเซรั่ม แอนติบอดีเหล่านั้นอาจจับกับแอนติเจนของเชื้อ HIV จากนั้นจะล้างจานเพื่อกำจัดส่วนประกอบอื่นๆ ของเซรั่มออกไป จากนั้นจะนำ " แอนติบอดีรอง " ที่เตรียมไว้เป็นพิเศษ ซึ่งเป็นแอนติบอดีที่จับกับแอนติบอดีของมนุษย์ มาใส่ในจาน ตามด้วยการล้างอีกครั้ง แอนติบอดีรองนี้จะถูกเชื่อมต่อทางเคมีกับเอนไซม์ไว้ ล่วงหน้า ดังนั้นจานจะมีเอนไซม์ในสัดส่วนที่สัมพันธ์กับปริมาณของแอนติบอดีรองที่จับกับจาน จากนั้น จะใส่ สารตั้งต้นสำหรับเอนไซม์ และการเร่งปฏิกิริยาโดยเอนไซม์จะทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงสีหรือการเรืองแสง ผลการทดสอบ ELISA จะรายงานเป็นตัวเลข ประเด็นที่ถกเถียงกันมากที่สุดเกี่ยวกับการทดสอบนี้คือการกำหนด "จุดตัด" ระหว่างผลบวกและผลลบ

นักวิจัยจากมหาวิทยาลัยโคลัมเบียได้ผลิตดอง เกิลทดสอบ ELISA ที่สามารถทดสอบหาเชื้อ HIV และซิฟิลิส ได้ สามารถใช้งานร่วมกับสมาร์ทโฟนหรือคอมพิวเตอร์เครื่องใดก็ได้โดยไม่ต้องใช้อุปกรณ์เสริมหรือพลังงานแบตเตอรี่ และใช้เวลาประมาณสิบห้านาทีในการวิเคราะห์เลือดเพียงหยดเดียว ต้นทุนการผลิตต่อหน่วยอยู่ที่ประมาณ 34 ดอลลาร์สหรัฐ^{[ 16 ]}

เช่นเดียวกับวิธีการ ELISA วิธีการเวสเทิร์นบลอตเป็นการทดสอบการตรวจหาแอนติบอดี อย่างไรก็ตาม ต่างจากวิธีการ ELISA ตรงที่โปรตีนของไวรัสจะถูกแยกออกก่อนและตรึงไว้ ในขั้นตอนต่อมา การจับกันของแอนติบอดีในซีรั่มกับโปรตีน HIV ที่จำเพาะจะถูกแสดงให้เห็น

โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เซลล์ที่อาจติดเชื้อ HIV จะถูกเปิดออก และโปรตีนภายในจะถูกนำไปวางบนแผ่นเจล จากนั้นจึงปล่อยกระแสไฟฟ้าเข้าไป โปรตีนแต่ละชนิดจะเคลื่อนที่ด้วยความเร็วที่แตกต่างกันในบริเวณที่มีกระแสไฟฟ้า ขึ้นอยู่กับขนาดของโปรตีน ในขณะที่ประจุไฟฟ้าของโปรตีนจะถูกปรับให้สมดุลโดยสารลดแรงตึงผิวที่เรียกว่าโซเดียมลอริลซัลเฟตชุดทดสอบ Western blot ที่วางจำหน่ายในเชิงพาณิชย์บางชุดจะมีโปรตีน HIV อยู่บนแถบเซลลูโลสอะซิเตตแล้ว เมื่อโปรตีนแยกออกจากกันได้ดีแล้ว จะถูกถ่ายโอนไปยังเมมเบรน และขั้นตอนจะดำเนินต่อไปคล้ายกับ ELISA คือ เซรั่มที่เจือจางของบุคคลนั้นจะถูกนำไปใช้กับเมมเบรน และแอนติบอดีในเซรั่มอาจจับกับโปรตีน HIV บางส่วน แอนติบอดีที่ไม่จับจะถูกล้างออก และแอนติบอดีที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ซึ่งมีความสามารถในการจับกับแอนติบอดีของบุคคลนั้นจะเป็นตัวกำหนดว่าบุคคลนั้นมีแอนติบอดีต่อโปรตีน HIV ชนิดใด

ไม่มีเกณฑ์สากลสำหรับการตีความผลการทดสอบเวสเทิร์นบลอต : จำนวนแถบไวรัสที่ต้องปรากฏอาจแตกต่างกันไป หากตรวจไม่พบแถบไวรัส ผลลัพธ์จะเป็นลบ หาก พบแถบไวรัสอย่างน้อยหนึ่งแถบสำหรับแต่ละกลุ่มยีน GAG, POL และ ENV ผลลัพธ์จะเป็นบวก วิธีการตีความผลเวสเทิร์นบลอตโดยใช้กลุ่มยีนสามกลุ่มนี้ยังไม่ได้ถูกนำมาใช้ในด้านสาธารณสุขหรือการปฏิบัติทางคลินิก การทดสอบที่ตรวจพบแถบไวรัสน้อยกว่าจำนวนที่กำหนดจะรายงานว่าไม่แน่ชัด: ผู้ที่มีผลไม่แน่ชัดควรได้รับการทดสอบซ้ำ เนื่องจากผลการทดสอบในภายหลังอาจชัดเจนกว่า เกือบทุกคนที่ติดเชื้อเอชไอวีที่มีผลเวสเทิร์นบลอตไม่แน่ชัดจะมีผลเป็นบวกเมื่อทดสอบอีกครั้งในหนึ่งเดือนต่อมา ผลที่ไม่แน่ชัดอย่างต่อเนื่องเป็นระยะเวลาหกเดือนบ่งชี้ว่าผลลัพธ์นั้นไม่ได้เกิดจากการติดเชื้อเอชไอวี ในประชากรที่มีสุขภาพดีและมีความเสี่ยงต่ำ ผลที่ไม่แน่ชัดจากการทดสอบเวสเทิร์นบลอตเกิดขึ้นประมาณ 1 ใน 5,000 คน^{[ 17 ]}อย่างไรก็ตาม สำหรับบุคคลที่มีความเสี่ยงสูงต่อบุคคลที่เชื้อ HIV-2 แพร่ระบาดมากที่สุด เช่น แอฟริกาตะวันตก การทดสอบ Western blot ที่ให้ผลไม่ชัดเจนอาจพิสูจน์ได้ว่าติดเชื้อ HIV-2 ^{[ 18 ]}

โปรตีน HIV ที่ใช้ในการเวสเทิร์นบลอตติ้งสามารถผลิตได้จากดีเอ็นเอรีคอมบิแนนท์ในเทคนิคที่เรียกว่าการทดสอบอิมมูโนบลอตรีคอมบิแนนท์ (RIBA) ^{[ 19 ]}

การทดสอบแอนติบอดีแบบรวดเร็ว เป็นการทดสอบทางภูมิคุ้มกัน เชิงคุณภาพที่ออกแบบมาเพื่อใช้ใน การตรวจ วินิจฉัยการติดเชื้อเอชไอวีณ จุดดูแลผู้ป่วย ควรใช้การทดสอบเหล่านี้ควบคู่ไปกับสถานะทางคลินิก ประวัติ และปัจจัยเสี่ยงของผู้เข้ารับการทดสอบ ยังไม่มีการประเมิน ค่าความแม่นยำในการทำนายผลบวกของการทดสอบแอนติบอดีแบบรวดเร็วในกลุ่มประชากรที่มีความเสี่ยงต่ำ ควรใช้การทดสอบเหล่านี้ในขั้นตอนวิธี ทดสอบหลายวิธีที่เหมาะสม ซึ่งออกแบบมาเพื่อตรวจสอบความถูกต้องทางสถิติของผลการทดสอบเอชไอวีแบบรวดเร็ว

หากตรวจไม่พบแอนติบอดีต่อเชื้อ HIV ก็ไม่ได้หมายความว่าบุคคลนั้นไม่เคยติดเชื้อ HIV อาจต้องใช้เวลาหลายเดือนหลังจากการติดเชื้อ HIV กว่าที่ระดับแอนติบอดีจะถึงระดับที่ตรวจพบได้ ในช่วงเวลานั้น การตรวจหาแอนติบอดีต่อเชื้อ HIV อย่างรวดเร็วจะไม่สามารถบ่งชี้สถานะการติดเชื้อที่แท้จริงได้ สำหรับคนส่วนใหญ่ ระดับแอนติบอดีต่อเชื้อ HIV จะถึงระดับที่ตรวจพบได้หลังจากสองถึงหกสัปดาห์

แม้ว่าการทดสอบเหล่านี้จะมีประสิทธิภาพสูง แต่ก็อาจเกิดผลบวกปลอมได้ ผลการทดสอบที่เป็นบวกใดๆ ควรได้รับการยืนยันจากห้องปฏิบัติการโดยใช้วิธีเวสเทิร์นบลอต

นอกจากนี้ ยังมี ชุดตรวจหาแอนติเจน/แอนติบอดีแบบรวดเร็วให้เลือกใช้ด้วย

การตรวจ ELISA เพียงอย่างเดียวไม่สามารถใช้ในการวินิจฉัยโรค HIV ได้ แม้ว่าผลการตรวจจะบ่งชี้ว่ามีความเป็นไปได้สูงที่จะมีแอนติบอดีต่อ HIV-1 ก็ตาม ในสหรัฐอเมริกา ผลการตรวจ ELISA ดังกล่าวจะไม่ถูกรายงานว่า "เป็นบวก" เว้นแต่จะได้รับการยืนยันด้วยวิธี Western blot

การทดสอบแอนติบอดี ELISA ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อให้มั่นใจในระดับสูงว่าเลือดที่บริจาคไม่ติดเชื้อ HIV ดังนั้นจึงไม่สามารถสรุปได้ว่าเลือดที่ถูกปฏิเสธการถ่ายเลือดเนื่องจากผล การทดสอบแอนติบอดี ELISA เป็นบวกนั้นติดเชื้อ HIV จริงๆ บางครั้ง การตรวจซ้ำผู้บริจาคในอีกหลายเดือนต่อมาอาจให้ผล การทดสอบแอนติบอดี ELISA เป็นลบนี่คือเหตุผลที่ต้องใช้การทดสอบยืนยันด้วยวิธี Western blot เสมอ ก่อนที่จะรายงานผลการทดสอบ HIV ว่า "เป็นบวก"

ผลบวกปลอมที่เกิดขึ้นได้ยากเนื่องจากปัจจัยที่ไม่เกี่ยวข้องกับการสัมผัสเชื้อ HIV มักพบได้บ่อยกว่าในการทดสอบ ELISA มากกว่าการทดสอบ Western Blot ผลบวกปลอมอาจเกี่ยวข้องกับภาวะทางการแพทย์ เช่น การเจ็บป่วยเฉียบพลันและอาการแพ้เมื่อเร็วๆ นี้ การตรวจที่ให้ผลบวกปลอมจำนวนมากในช่วงฤดูใบไม้ร่วงปี 1991 ในตอนแรกถูกกล่าวโทษว่าเป็นผลมาจากวัคซีนไข้หวัดใหญ่ที่ใช้ในฤดูไข้หวัดใหญ่นั้น แต่การตรวจสอบเพิ่มเติมพบว่าปฏิกิริยาข้ามสายพันธุ์เกิดจากชุดทดสอบที่ไม่จำเพาะเจาะจงหลายชุด^{[ 20 ]} ผลบวกปลอมไม่ได้บ่งชี้ถึงภาวะที่มีความเสี่ยงต่อสุขภาพอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อรวมการทดสอบ ELISA กับ Western Blot อัตราการเกิดผลบวกปลอมจะต่ำมาก และความแม่นยำในการวินิจฉัยจะสูงมาก (ดูด้านล่าง)

การตรวจหาแอนติบอดีของเชื้อ HIV มีความไวสูง หมายความว่ามันจะทำปฏิกิริยากับแอนติบอดีของเชื้อ HIV เป็นหลัก แต่ผลการตรวจ ELISA ที่ให้ผลบวกหรือผลไม่แน่ชัดไม่ได้หมายความว่าบุคคลนั้นติดเชื้อ HIV เสมอไป ควรพิจารณาประวัติความเสี่ยงและการวินิจฉัยทางคลินิกประกอบการประเมิน และควรทำการทดสอบยืนยัน (เวสเทิร์นบลอต) บุคคลที่มีผลการตรวจไม่แน่ชัดควรได้รับการตรวจซ้ำในภายหลัง

การทดสอบเอชไอวีสมัยใหม่มีความแม่นยำสูง หลักฐานเกี่ยวกับความเสี่ยงและประโยชน์ของการตรวจคัดกรองเอชไอวีได้รับการทบทวนในเดือนกรกฎาคม พ.ศ. 2548 โดยคณะทำงานบริการป้องกันโรคแห่งสหรัฐอเมริกา^{[ 21 ]}ผู้เขียนสรุปว่า:

...การใช้เอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์แบบทำปฏิกิริยาซ้ำๆ ตามด้วยการยืนยันด้วยวิธีเวสเทิร์นบลอตหรืออิมมูโนฟลูออเรสเซนต์แอสเซย์ ยังคงเป็นวิธีการมาตรฐานในการวินิจฉัยการติดเชื้อ HIV-1 การศึกษาขนาดใหญ่เกี่ยวกับการทดสอบ HIV ในห้องปฏิบัติการ 752 แห่งในสหรัฐอเมริกา รายงานว่าเอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์มีความไว 99.7% และความจำเพาะ 98.5% และการศึกษาในผู้บริจาคโลหิตในสหรัฐอเมริกา รายงานความจำเพาะที่ 99.8% และมากกว่า 99.99% ด้วยการยืนยันด้วยวิธีเวสเทิร์นบลอต โอกาสที่จะพบผลบวกปลอมในพื้นที่ที่มีอัตราการแพร่ระบาดต่ำอยู่ที่ประมาณ 1 ใน 250,000 (ช่วงความเชื่อมั่น 95% อยู่ที่ 1 ใน 173,000 ถึง 1 ใน 379,000)

อัตราความจำเพาะที่ระบุไว้ในที่นี้สำหรับชุดตรวจคัดกรองเอชไอวีแบบเอนไซม์ราคาไม่แพง บ่งชี้ว่า ในผลตรวจเอชไอวี 1,000 รายของผู้ที่มีสุขภาพดี ประมาณ 15 รายจะเป็นผลบวกปลอมการยืนยันผลตรวจ (เช่น โดยการตรวจซ้ำ หากมีตัวเลือกนี้) สามารถลดโอกาสการเกิดผลบวกปลอมลงเหลือประมาณ 1 รายใน 250,000 ราย ในทำนองเดียวกัน อัตรา ความไวบ่งชี้ว่า ในผลตรวจ 1,000 รายของผู้ติดเชื้อเอชไอวี จะมี ผล ลบปลอม 3 ราย อย่างไรก็ตาม จากอัตราการแพร่ระบาดของเอชไอวีในศูนย์ตรวจส่วนใหญ่ในสหรัฐอเมริกาค่าการทำนายผลลบของชุดตรวจเหล่านี้สูงมาก หมายความว่า ผลตรวจที่เป็นลบจะถูกต้องมากกว่า 9,997 ครั้งใน 10,000 ครั้ง (99.97% ของเวลา) ค่าการทำนายผลลบที่สูงมากของชุดตรวจเหล่านี้เป็นเหตุผลที่ CDC แนะนำให้พิจารณาผลตรวจที่เป็นลบเป็นหลักฐานที่แน่ชัดว่าบุคคลนั้นไม่มีเชื้อเอชไอวี

แน่นอนว่า ตัวเลขที่แท้จริงจะแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับกลุ่มประชากรที่ทำการทดสอบ เนื่องจากการตีความผลการตรวจทางการแพทย์ใดๆ (โดยสมมติว่าไม่มีการทดสอบใดแม่นยำ 100%) ขึ้นอยู่กับระดับความเชื่อเบื้องต้น หรือความน่าจะเป็นก่อนหน้าว่าบุคคลนั้นมีหรือไม่มีโรค โดยทั่วไปแล้ว ความน่าจะเป็นก่อนหน้าจะถูกประมาณโดยใช้ความชุกของโรคในประชากรหรือในสถานที่ทำการทดสอบที่กำหนดค่าการทำนายผลบวกและค่าการทำนายผลลบของการทดสอบทั้งหมด รวมถึงการทดสอบเอชไอวี จะคำนึงถึงความน่าจะเป็นก่อนหน้าของการเป็นโรคควบคู่ไปกับความแม่นยำของวิธีการทดสอบเพื่อกำหนดระดับความเชื่อใหม่ว่าบุคคลนั้นมีหรือไม่มีโรค (หรือที่เรียกว่าความน่าจะเป็นภายหลัง ) โอกาสที่ผลการทดสอบเป็นบวกจะบ่งชี้การติดเชื้อเอชไอวีได้อย่างแม่นยำจะเพิ่มขึ้นเมื่อความชุกหรืออัตราการติดเชื้อเอชไอวีเพิ่มขึ้นในประชากร ในทางกลับกัน ค่าการทำนายผลลบจะลดลงเมื่อความชุกของเอชไอวีเพิ่มขึ้น ดังนั้น ผลตรวจที่เป็นบวกในกลุ่มประชากรที่มีความเสี่ยงสูง เช่น ผู้ที่มักมีเพศสัมพันธ์ทางทวารหนักโดยไม่ใช้ถุงยางอนามัยกับคู่ที่ไม่รู้จัก จึงมีแนวโน้มที่จะบ่งชี้ว่าติดเชื้อเอชไอวีได้ถูกต้องมากกว่าผลตรวจที่เป็นบวกในกลุ่มประชากรที่มีความเสี่ยงต่ำมาก เช่น ผู้บริจาคโลหิตโดยไม่ได้รับค่าตอบแทน

การศึกษาหลายชิ้นยืนยันความถูกต้องของวิธีการตรวจหาเชื้อเอชไอวีในปัจจุบันในสหรัฐอเมริกาโดยรายงานอัตราผลบวกเท็จที่ 0.0004 ถึง 0.0007 และอัตราผลลบเท็จที่ 0.003 ในประชากรทั่วไป^{[ 22 ] [ 23 ] [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ] [ 28 ] [ 29 ]}

เนื่องจากอัตราผลบวกปลอมที่เพิ่มขึ้นจากการทดสอบเอชไอวีทางปากแบบรวดเร็วในปี 2548 กรมอนามัยและสุขภาพจิตแห่งนครนิวยอร์กจึงเพิ่มตัวเลือกในการทดสอบเลือดครบส่วนจากปลายนิ้วหลังจากผลการทดสอบเป็นบวกใดๆ ก่อนที่จะใช้การทดสอบเวสเทิร์นบลอตเพื่อยืนยันผลบวก หลังจากพบผลบวกปลอมเพิ่มขึ้นอีกในคลินิกโรคติดต่อทางเพศสัมพันธ์ของกรมอนามัยและสุขภาพจิตแห่งนครนิวยอร์กในช่วงปลายปี 2550 และต้นปี 2551 คลินิกเหล่านั้นจึงเลือกที่จะงดการตรวจคัดกรองทางปากเพิ่มเติม และกลับมาใช้การทดสอบโดยใช้เลือดครบส่วนจากปลายนิ้วแทน^{[ 43 ]}แม้ว่าผลบวกปลอมจะเพิ่มขึ้นในกรมอนามัยและสุขภาพจิตแห่งนครนิวยอร์ก แต่ CDC ยังคงสนับสนุนการใช้ตัวอย่างของเหลวในช่องปากแบบไม่รุกราน เนื่องจากเป็นที่นิยมในคลินิกสุขภาพและใช้งานง่าย ผู้อำนวยการโครงการควบคุมเอชไอวีสำหรับสาธารณสุขที่ซีแอตเทิลคิงเคาน์ตี้ รายงานว่า OraQuick ล้มเหลวในการตรวจพบผู้ติดเชื้ออย่างน้อย 8 เปอร์เซ็นต์จาก 133 คนที่พบว่าติดเชื้อด้วยการทดสอบวินิจฉัยที่เทียบเคียงได้^{[ 44 ]}ได้มีการนำกลยุทธ์ที่นำมาใช้เพื่อกำหนดการควบคุมคุณภาพและอัตราผลบวกปลอมมาใช้ เป็นที่เข้าใจได้ว่าผลการทดสอบ OraQuick ที่เป็นปฏิกิริยาใดๆ ถือเป็นผลบวกเบื้องต้น และจะต้องมีการทดสอบยืนยันเสมอ ไม่ว่าจะใช้วิธีการทดสอบแบบใด (เลือดครบส่วนจากการเจาะเส้นเลือดดำ เลือดครบส่วนจากการเจาะปลายนิ้ว หรือของเหลวจากเยื่อบุช่องปาก) ^{[ 45 ]}สถานที่ทดสอบอื่นๆ อีกหลายแห่งที่ไม่ได้ประสบกับอัตราผลบวกปลอมที่เพิ่มสูงขึ้น ยังคงใช้การทดสอบแอนติบอดี HIV OraQuick ของ OraSure ต่อไป^{[ 46 ] [ 47 ]}

การทดสอบ HIV ได้รับการวิพากษ์วิจารณ์จากกลุ่มผู้ปฏิเสธโรคเอดส์ (กลุ่มเล็กๆ ที่สมาชิกเชื่อว่า HIV ไม่มีอยู่จริงหรือไม่เป็นอันตราย) ความแม่นยำของการทดสอบทางซีรัมวิทยาได้รับการยืนยันโดยการแยกและการเพาะเลี้ยง HIV และโดยการตรวจหาRNA ของ HIV โดยPCRซึ่งถือเป็น " มาตรฐานทองคำ " ที่ได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวางในจุลชีววิทยา^{[ 24 ] [ 25 ]}ในขณะที่กลุ่มผู้ปฏิเสธโรคเอดส์มุ่งเน้นไปที่ส่วนประกอบแต่ละส่วนของการทดสอบ HIV การรวมกันของ ELISA และ western blot ที่ใช้ในการวินิจฉัย HIV นั้นมีความแม่นยำอย่างมาก โดยมีอัตราผลบวกเท็จและผลลบเท็จต่ำมากดังที่ได้อธิบายไว้ข้างต้น มุมมองของกลุ่มผู้ปฏิเสธโรคเอดส์นั้นอิงจากการวิเคราะห์ที่เลือกสรรมาอย่างดีจากเอกสารทางวิทยาศาสตร์ที่ล้าสมัยเป็นส่วนใหญ่ มีฉันทามติทางวิทยาศาสตร์ อย่างกว้างขวาง ว่า HIV เป็นสาเหตุของโรคเอดส์^{[ 48 ] [ 49 ] [ 50 ]}