กลับไปหน้าบทความ

อ่าน 4 นาที

ไม่มีชื่อบทความ

ไมโคร แคริเออร์ เป็นเมทริกซ์รองรับที่ช่วยให้ เซลล์ยึดเกาะเจริญ เติบโต ใน ไบโอรีแอคเตอร์ แทนที่จะเพาะเลี้ยงบนพื้นผิวเรียบ เซลล์จะถูกเพาะเลี้ยงบนพื้นผิวของไมโครแคริเออร์ทรงกลม...

ไมโครแคริเออร์

ไมโครแคริเออร์เป็นเมทริกซ์รองรับที่ช่วยให้เซลล์ยึดเกาะเจริญ เติบโต ในไบโอรีแอคเตอร์แทนที่จะเพาะเลี้ยงบนพื้นผิวเรียบ เซลล์จะถูกเพาะเลี้ยงบนพื้นผิวของไมโครแคริเออร์ทรงกลม โดยแต่ละอนุภาคจะบรรจุเซลล์ได้หลายร้อยเซลล์ ดังนั้นความสามารถในการขยายตัวจึงสามารถเพิ่มขึ้นได้หลายเท่า[ 1 ] วิธีนี้เป็นวิธีที่ตรงไปตรงมาในการขยายระบบการเพาะเลี้ยงเพื่อการผลิตในระดับอุตสาหกรรมของเซลล์หรือ โปรตีนที่ใช้เป็นพื้นฐานหรือเพื่อวัตถุประสงค์ในการวิจัย[ 2 ] [ 3 ]

 เมทริกซ์ทรงกลมที่เป็นของแข็งหรือมีรูพรุนเหล่านี้มี เส้นผ่านศูนย์กลางตั้งแต่ 100-300 ไมโครเมตร เพื่อให้มีพื้นที่ผิวเพียงพอในขณะที่ยังคง รักษาการยึดเกาะและการรองรับเซลล์ ไว้ได้เพียงพอ และมีความหนาแน่นเพียงเล็กน้อยเหนือความหนาแน่นของน้ำ (1 กรัม/มิลลิลิตร) เพื่อให้ยังคงแขวนลอยอยู่ในถังที่มีการกวน[ 1 ] [ 4 ]เมทริกซ์เหล่านี้สามารถประกอบด้วยวัสดุสังเคราะห์ เช่น อะคริลาไมด์ หรือวัสดุธรรมชาติ เช่น เจลาติน[ 2 ] [ 3 ]

ข้อดีของเทคโนโลยีไมโครแคริเออร์ในอุตสาหกรรมเทคโนโลยีชีวภาพ ได้แก่ (ก) ความง่ายในการขยายขนาด (ข) ความสามารถในการควบคุมสภาวะการเจริญเติบโตของเซลล์ได้อย่างแม่นยำในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพที่ซับซ้อนซึ่งควบคุมด้วยคอมพิวเตอร์ (ค) การลดพื้นที่และปริมาตรของตู้บ่มเพาะโดยรวมที่จำเป็นสำหรับการดำเนินงานการผลิตที่มีขนาดที่กำหนด (ง) การลดแรงงานช่างเทคนิคลงอย่างมาก และ (จ) สภาพแวดล้อมที่เป็นธรรมชาติมากขึ้นสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ส่งเสริมการแบ่งตัว[ 5 ]

เซลล์ iPSC ของมนุษย์ที่เพาะเลี้ยงบนไมโครแคริเออร์ในขวดปั่นเหวี่ยง

องค์ประกอบของไมโครแคริเออร์

ไมโครแคริเออร์สังเคราะห์และจากธรรมชาติ

มีไมโครแคริเออร์หลายประเภทที่สามารถใช้งานได้ ซึ่งการเลือกใช้เป็นสิ่งสำคัญอย่างยิ่งต่อประสิทธิภาพสูงสุดในการใช้งาน ในช่วงแรกของการพัฒนาไมโครแคริเออร์ วัสดุสังเคราะห์ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลาย เนื่องจากช่วยให้ควบคุมคุณสมบัติทางกลได้ง่ายและให้ผลลัพธ์ที่ทำซ้ำได้สำหรับการประเมินประสิทธิภาพ[ 3 ]วัสดุเหล่านี้ได้แก่ DEAE-dextran, แก้ว, พลาสติก โพลีสไตรีนและอะคริลาไมด์[ 3 ] ในปี 1967 การพัฒนาไมโครแคริเออร์เริ่มต้นขึ้นเมื่อ van Wezel พบว่าวัสดุสามารถรองรับการเจริญเติบโตของเซลล์ที่ต้องอาศัยการยึดเกาะ และเขาใช้ไมโครแคริเออร์ไดเอทิลอะมิโนเอทิล-เซฟาเด็กซ์[ 3 ]อย่างไรก็ตาม โพลิเมอร์สังเคราะห์ขัดขวางการปฏิสัมพันธ์ของเซลล์กับสิ่งแวดล้อมอย่างเพียงพอและทำให้การเจริญเติบโต ของเซลล์ชะงักงัน [ 4 ]เซลล์อาจไม่สามารถแยกแยะได้อย่างถูกต้องหากไม่มีการตอบรับจากสิ่งแวดล้อม และระดับการยึดเกาะจะต่ำ[ 3 ]ดังนั้น การพัฒนาไมโครแคริเออร์รุ่นที่สองจึงเกี่ยวข้องกับการใช้โพลิเมอร์จากธรรมชาติ เช่นเจลาตินคอลลาเจนไคติน และอนุพันธ์ของไคติ นและเซลลูโลส[ 2 ]วัสดุเหล่านี้ไม่เพียงแต่หาได้ง่ายเท่านั้น แต่ยังเป็นวัสดุธรรมชาติที่ให้จุดยึดเกาะสำหรับเซลล์และสภาพแวดล้อมขนาดเล็กที่คล้ายคลึงกันซึ่งให้เส้นทางการส่งสัญญาณของเซลล์ที่จำเป็นสำหรับการแยกตัวอย่างเหมาะสม[ 3 ]ยิ่งไปกว่านั้น เนื่องจากวัสดุเหล่านี้เข้ากันได้ทางชีวภาพ สารแขวนลอยที่ได้จึงสามารถใช้สำหรับการส่งมอบการบำบัดด้วยเซลล์ในร่างกายได้[ 1 ]

ไมโครแคริเออร์แบบแข็งและแบบมีรูพรุน

แม้ว่าจะมีการพัฒนาไมโครแคริเออร์แบบของเหลวแล้ว แต่ไมโครแคริเออร์ที่มีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ส่วนใหญ่เป็นอนุภาคของแข็งที่สังเคราะห์ขึ้นผ่าน พอลิเมอไรเซชัน แบบแขวนลอย[ 3 ]อย่างไรก็ตาม เซลล์ที่เจริญเติบโตบนไมโครแคริเออร์ของแข็งมีความเสี่ยงที่จะได้รับความเสียหายจากแรงภายนอกและการชนกับอนุภาคอื่นๆ และถัง[ 4 ]ดังนั้นจึงต้องใช้ความระมัดระวังเป็นพิเศษในการกำหนดความเร็วและกลไกการกวน เพื่อให้แรงไดนามิกของของเหลวที่เกิดขึ้นไม่รุนแรงพอที่จะส่งผลเสียต่อการเพาะเลี้ยง[ 4 ] [ 3 ]การพัฒนาไมโครแคริเออร์แบบมีรูพรุนได้ขยายขีดความสามารถของเทคโนโลยีนี้อย่างมาก เนื่องจากช่วยเพิ่มจำนวนเซลล์ที่วัสดุสามารถบรรจุได้มากขึ้น แต่ที่สำคัญกว่านั้นคือ ช่วยปกป้องเซลล์ภายในอนุภาคจากแรงภายนอก[ 3 ] ซึ่งรวมถึงแรงต้านและแรงเสียดทานของของเหลวแขวนลอย การไล่ระดับความดันและแรงเฉือน[ 1 ]ทศวรรษ 1980 เป็นช่วงเวลาแห่งการพัฒนาไมโครแคริเออร์อย่างมากมายด้วยการค้นพบอนุภาคแบบมีรูพรุน[ 4 ]

การปรับเปลี่ยนพื้นผิว

ไมโครแคริเออร์ที่ทำจากวัสดุชนิดเดียวกันอาจแตกต่างกันในด้านความพรุนความหนาแน่นจำเพาะคุณสมบัติทางแสง การมีส่วนประกอบของสัตว์ และเคมีพื้นผิว[ 4 ]เคมีพื้นผิวอาจรวมถึงโปรตีนเมทริกซ์นอกเซลล์กลุ่มฟังก์ชัน โปรตีนรีคอมบิแนนท์ เปปไทด์และโมเลกุลที่มีประจุบวกหรือลบ ซึ่งเพิ่มเข้ามาผ่านการเชื่อมต่อ การโคพอลิเมอไรเซชัน การบำบัดด้วยพลาสมา หรือการปลูกถ่าย[ 3 ]สิ่งเหล่านี้อาจช่วยให้เซลล์ยึดเกาะกับอนุภาคได้ในระดับที่สูงขึ้น ควบคุมการปลดปล่อยเพื่อการแยก หรือทำให้อนุภาคทนต่อความร้อนและทางกายภาพได้มากขึ้น เป็นต้น[ 3 ]

ไมโครแคริเออร์หลายประเภทมีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ ได้แก่ ไมโครแคริเออร์ที่ทำจาก อัลจิเนต (GEM, Global Cell Solutions), ไมโครแคริเออร์ที่ทำ จากเดกซ์แทรน (Cytodex, GE Healthcare ), ไมโครแคริเออร์ที่ทำจาก คอลลาเจน (Cultispher, Percell) และ ไมโครแคริเออร์ที่ทำจาก โพลีสไตรีน (SoloHill Engineering) [ 5 ]  

ตารางที่ 1. ไมโครแคริเออร์ที่มีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์และคุณสมบัติของไมโครแคริเออร์เหล่านั้น[ 3 ]
ชื่อขนาด (ไมโครเมตร)ความหนาแน่น (กรัม/มิลลิลิตร)วัสดุ
ไซโตเด็กซ์-160–871.03เมทริกซ์เดกซ์แทรนที่มีหมู่ไดเอทิลอะมิโนเอทิลที่มีประจุบวกกระจายอยู่ทั่วทั้งเมทริกซ์
ไซโตเด็กซ์-260–871.04เมทริกซ์เดกซ์แทรนที่มี หมู่ N , N , N-ไตรเมทิล-2-ไฮดรอกซีอะมิโนโพรพิล
ไซโตเด็กซ์-360–871.04ลูกปัดเดกซ์แทรนเคลือบด้วยคอลลาเจนจากหนังหมูที่ผ่านกระบวนการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างและยึดติดอยู่บนพื้นผิว
ไซโทพอร์ 1200–2801.03เซลลูโลส
คัลติสเฟียร์ จี130–3801.04เจลาตินหมูแบบเชื่อมโยงข้าม
คัลติสเฟียร์ เอส130–3801.04เจลาตินหมูแบบเชื่อมโยงข้าม
ฮิลเล็กซ์150–2101.1เมทริกซ์เดกซ์แทรนที่มีพื้นผิวที่ผ่านการบำบัด
เคลือบแก้ว90–1501.05กระจก

ข้อดีเหนือกว่าการเพาะเลี้ยงเซลล์แบบดั้งเดิม

ความสามารถในการขยายตัว

ข้อได้เปรียบที่โดดเด่นในการใช้สารแขวนลอยไมโครแคริเออร์สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์เมื่อเทียบกับจานสองมิติแบบดั้งเดิมคือความสามารถในการบรรจุเซลล์ได้มากขึ้นในปริมาตรที่เล็กกว่า[ 1 ] [ 6 ]ลักษณะเด่นของโปรโตคอลห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเซลล์ทั่วไปคือการถ่ายโอนเซลล์ อย่างต่อเนื่อง เมื่อเซลล์ถึงความหนาแน่นบนจานค่อนข้างเร็ว ซึ่งเป็นปัญหาคอขวดในการผลิตยาชีวภาพ[ 1 ]ภาชนะหลายชั้น จานซ้อนกันเส้นใยกลวงและ เครื่องปฏิกรณ์ แบบบรรจุแน่นเป็นเทคโนโลยีอื่นๆ ที่พัฒนาขึ้นเพื่อต่อสู้กับข้อจำกัดด้านความจุนี้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์บนจาน[ 1 ] [ 2 ]แม้ว่าจะเป็นการปรับปรุง แต่จำนวนเซลล์ที่ผลิตผ่านวิธีการเหล่านี้ก็ยังไม่ถึงเกณฑ์สำหรับการใช้งานทางคลินิก[ 2 ]อย่างไรก็ตาม การเพาะเลี้ยงเซลล์ด้วยไมโครแคริเออร์เป็นความก้าวหน้าที่จำเป็นสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ให้มีความสำคัญในระดับอุตสาหกรรมและทางคลินิก[ 2 ]การศึกษาแสดงให้เห็นว่าสารแขวนลอยไมโครแคริเออร์ เมื่อเปรียบเทียบกับการเพาะเลี้ยงในภาชนะหลายชั้น ช่วยเพิ่มผลผลิตเซลล์ได้ถึง 80 เท่า โดยใช้พื้นที่เพียงร้อยละ 10 ของ พื้นที่ตาม หลักปฏิบัติที่ดีในการผลิตและต้นทุนเพียงร้อยละ 60 ของต้นทุนเดิม[ 4 ]หากไม่จำเป็นต้องมีการส่งต่ออย่างต่อเนื่อง ความเสี่ยงของการปนเปื้อนของแบคทีเรียก็จะลดลง และต้นทุนแรงงานก็จะลดลงด้วย[ 2 ]

ความเป็นเนื้อเดียวกัน

การเพาะเลี้ยงแบบสองมิติยังประสบปัญหาการแพร่กระจายของสารอาหารและก๊าซที่ไม่ดี ทำให้ต้องเติมอาหารเลี้ยงเชื้อและสารเสริมต่างๆ แล้วกระจายอย่างสม่ำเสมอด้วยตนเอง ซึ่งอาจส่งผลให้ได้ข้อมูลที่ไม่สามารถทำซ้ำได้[ 1 ] [ 2 ]การแขวนลอยเซลล์บนไมโครแคริเออร์ในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพแบบกวนช่วยให้การกระจายตัวสม่ำเสมอผ่านการกวนที่เป็นเนื้อเดียวกัน[ 1 ]พารามิเตอร์ต่างๆ เช่น pH ความดันออกซิเจน และความเข้มข้นของอาหารเลี้ยงเชื้อเสริม สามารถตรวจสอบได้อย่างต่อเนื่องภายในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ ต่างจากการทดสอบตัวอย่างขนาดเล็กจากจานเพาะเชื้อด้วยตนเอง[ 2 ]อย่างไรก็ตาม ความเร็วในการกวนที่สูงเกินไปอาจทำให้เกิดการชนกันระหว่างอนุภาคและกับเครื่องปฏิกรณ์ ซึ่งอาจทำให้เกิดความเสียหายได้ และความเร็วที่ต่ำเกินไปอาจยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์โดยทำให้เกิดการสะสมของอนุภาคใน 'โซนตาย' และป้องกันการกระจายตัวของสารอาหารที่จำเป็นอย่างสม่ำเสมอ[ 1 ] [ 4 ]ดังนั้น จึงต้องคำนวณค่าความชันของความเร็วขั้นต่ำและสูงสุดเพื่อให้สารแขวนลอยมีความเป็นเนื้อเดียวกัน แต่ยังได้รับการปกป้องจากแรงที่ไม่จำเป็นอีกด้วย[ 2 ] [ 6 ]กลไกที่มีประสิทธิภาพที่สุดสำหรับสิ่งนี้มักจะเป็นเครื่องกวนแบบแกนหมุนภายในไบโอรีแอคเตอร์ ซึ่งช่วยให้การผสมมีประสิทธิภาพที่ความเร็วในการกวนน้อยที่สุด[ 4 ]ลักษณะที่เป็นเนื้อเดียวกันของไบโอรีแอคเตอร์ที่ทำงานได้ดียังช่วยให้ขั้นตอนการสุ่มตัวอย่างและการตรวจสอบทำได้ง่ายขึ้น เมื่อเทียบกับการเพาะเลี้ยงแบบสองมิติซึ่งมักประสบปัญหาจากขั้นตอนการสุ่มตัวอย่างที่ยุ่งยาก[ 4 ] [ 2 ] [ 6 ]

สภาพแวดล้อมจุลภาคทางสรีรวิทยา

นอกจากนี้ สภาพแวดล้อมการแขวนลอยแบบสามมิติและความหนาแน่นสูงยังส่งเสริมรูปร่างและการแยกตัวของเซลล์ตามธรรมชาติผ่านการกระตุ้นทางกล[ 1 ]ในทางกลับกัน การเพาะเลี้ยงบนจานแบบสองมิติมีแนวโน้มที่จะทำให้เซลล์เกิดการแยกตัวซ้ำหลายครั้ง ดังนั้นจำนวนรอบการเพาะเลี้ยงทั้งหมดจึงต้องมีจำกัด[ 1 ]

การแปลเชิงอุตสาหกรรม

นอกจากนี้ การแขวนลอยไมโครแคริเออร์ยังสามารถขยายขนาดได้ง่าย โดยใช้ไมโครอนุภาคที่มีความเข้มข้นมากขึ้นในเครื่องปฏิกรณ์แบบกวนขนาดใหญ่ ในขณะที่พื้นที่ห้องปฏิบัติการที่ใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงยังคงสามารถจำกัดให้น้อยที่สุดได้[ 2 ]อย่างไรก็ตาม การขยายขนาดของแพลตฟอร์มไมโครแคริเออร์ยังก่อให้เกิดความท้าทายบางประการในกระบวนการผลิตขั้นปลายน้ำ[ 4 ]ซึ่งรวมถึงการปรับปรุงกระบวนการแยกและแยกเซลล์[ 4 ]จะต้องนำของเหลวแขวนลอยปริมาณมากออกจากถังปฏิกรณ์ชีวภาพขนาดใหญ่ ดังนั้นจึงต้องซื้ออุปกรณ์เพิ่มเติมเพื่อจัดการกับสารละลายหลายสิบถึงหลายร้อยลิตร แทนที่จะเป็นมิลลิลิตรมาตรฐาน[ 4 ]

ความเข้ากันได้ทางชีวภาพ

กำลังมีการศึกษาไมโครแคริเออร์เพื่อส่งเซลล์สำหรับการสร้างเนื้อเยื่อเป้าหมาย[ 3 ]เซลล์ตับเซลล์กระดูกอ่อน เซลล์ไฟโบรบลาสต์ และอื่นๆ ได้รับการส่งมอบสำเร็จโดยใช้ไมโครแคริเออร์ที่เข้ากันได้ทางชีวภาพไปยังเป้าหมายในร่างกายเพื่อซ่อมแซมเนื้อเยื่อที่เสียหาย[ 1 ]ไมโครแคริเออร์ยังสามารถใช้ในการส่งโมเลกุลขนาดเล็กและโปรตีนเพื่อวัตถุประสงค์เดียวกันได้อีกด้วย[ 5 ]

แอปพลิเคชัน

P. Chen และคณะได้พัฒนาวิธีการประกอบแบบใช้ของเหลวเพื่อประกอบไมโครแคริเออร์ที่เพาะเซลล์เป็นโครงสร้างที่หลากหลาย ไมโครแคริเออร์ที่เพาะ เซลล์ประสาทถูกประกอบเพื่อสร้างเครือข่ายประสาท 3 มิติที่มีรูปร่างโดยรวมที่ควบคุมได้ วิธีนี้อาจมีประโยชน์สำหรับวิศวกรรมเนื้อเยื่อและประสาทวิทยา[ 7 ]

สรุปเนื้อหา

ข้อมูลสำคัญจากบทความ

ข้อมูลสำคัญเกี่ยวกับ ไม่มีชื่อบทความ

ไมโคร แคริเออร์ เป็นเมทริกซ์รองรับที่ช่วยให้ เซลล์ยึดเกาะเจริญ เติบโต ใน ไบโอรีแอคเตอร์ แทนที่จะเพาะเลี้ยงบนพื้นผิวเรียบ เซลล์จะถูกเพาะเลี้ยงบนพื้นผิวของไมโครแคริเออร์ทรงกลม...

ไมโครแคริเออร์สังเคราะห์และจากธรรมชาติ

มีไมโครแคริเออร์หลายประเภทที่สามารถใช้งานได้ ซึ่งการเลือกใช้เป็นสิ่งสำคัญอย่างยิ่งต่อประสิทธิภาพสูงสุดในการใช้งาน ในช่วงแรกของการพัฒนาไมโครแคริเออร์ วัสดุสังเคราะห์ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลาย...

ไมโครแคริเออร์แบบแข็งและแบบมีรูพรุน

แม้ว่าจะมีการพัฒนาไมโครแคริเออร์แบบของเหลวแล้ว แต่ไมโครแคริเออร์ที่มีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ส่วนใหญ่เป็นอนุภาคของแข็งที่สังเคราะห์ขึ้นผ่าน พอลิเมอไรเซชัน แบบ แขวนลอย [ 3 ] อย่างไรก็ตาม...

การปรับเปลี่ยนพื้นผิว

ไมโครแคริเออร์ที่ทำจากวัสดุชนิดเดียวกันอาจแตกต่างกันในด้านความพรุน ความหนาแน่นจำเพาะ คุณสมบัติทางแสง การมีส่วนประกอบของสัตว์ และเคมีพื้นผิว [ 4 ] เคมีพื้นผิวอาจรวมถึงโปรตีนเมทริกซ์นอกเซลล์ กลุ่ม ฟังก์ชัน โปรตีนรีคอมบิแนน ท์ เปปไทด์...