ในการใช้กล้องจุลทรรศน์ การย้อมสีแบบลบ ( negative staining)เป็นวิธีการที่ได้รับการยอมรับและมักใช้ในกล้องจุลทรรศน์เพื่อการวินิจฉัยโรค เพื่อสร้างความแตกต่างระหว่างตัวอย่าง บางๆ กับของเหลวทึบแสงใน เทคนิคนี้ พื้นหลังจะถูกย้อมสีทำให้ตัวอย่างจริงไม่ถูกย้อมสีและยังคงมองเห็นได้ ซึ่งแตกต่างจากการย้อมสีแบบบวก (positive staining ) ที่ตัวอย่างจริงถูกย้อมสี

สำหรับ การใช้ กล้องจุลทรรศน์แบบส่องสว่างการย้อมสีแบบลบมักจะทำโดยใช้หมึกสีดำ เช่นไนโกรซินและหมึกอินเดียตัวอย่าง เช่น เชื้อ แบคทีเรียที่เพาะเลี้ยงแบบเปียกที่กระจายอยู่บนสไลด์แก้ว จะถูกผสมกับสีย้อมแบบลบและปล่อยให้แห้ง เมื่อมองผ่านกล้องจุลทรรศน์เซลล์แบคทีเรีย และอาจรวมถึงสปอร์ ของพวกมัน จะปรากฏเป็นสีอ่อนตัดกับพื้นหลังสีเข้มโดยรอบ มีการพัฒนาวิธีการทางเลือกโดยใช้ปากกาทำเครื่องหมายกันน้ำธรรมดาในการย้อมสีแบบลบ^{[ 1 ]}

ในกรณีของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่งผ่านความทึบแสงต่ออิเล็กตรอนเกี่ยวข้องกับเลขอะตอมกล่าวคือ จำนวนโปรตอน สารย้อมลบที่เหมาะสมบางชนิด ได้แก่แอมโมเนียมโมลิบเดต ยูรานิลอะซิเตต ยูรานิลฟอร์เมต กรดฟอสโฟทังสติกออสเมียมเตตรอกไซด์ออสเมียมเฟอร์ริไซยาไนด์^{[ 2 ]}และออโรกลูโคไทโอเนตสารเหล่านี้ถูกเลือกเพราะกระจายอิเล็กตรอนได้ดีและยังดูดซับกับสารชีวภาพได้ดี โครงสร้างที่สามารถย้อมลบได้นั้นมีขนาดเล็กกว่าโครงสร้างที่ศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงมาก ในที่นี้ วิธีนี้ใช้ในการดูไวรัสแบคทีเรียแฟลเจลลา ของแบคทีเรีย โครงสร้างเยื่อหุ้มเซลล์ชีวภาพและโปรตีนหรือโปรตีนรวมกลุ่ม ซึ่งทั้งหมดมีพลังการกระจายอิเล็กตรอนต่ำ สารย้อมบางชนิด เช่น ออสเมียมเตตรอกไซด์และออสเมียมเฟอร์ริไซยาไนด์ มีฤทธิ์ทางเคมีสูงมาก เนื่องจากเป็นสารออกซิแดนต์ที่แรง พวกมันจึงเชื่อมโยงลิพิดเข้าด้วยกันโดยส่วนใหญ่ทำปฏิกิริยากับพันธะคาร์บอน-คาร์บอนที่ไม่อิ่มตัว และด้วยเหตุนี้จึงตรึงเยื่อชีวภาพไว้ในตำแหน่งในตัวอย่างเนื้อเยื่อและย้อมสีไปพร้อมกัน^{[ 3 ] [ 4 ]}

การเลือกใช้สีย้อมลบในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนมีความสำคัญมาก การศึกษาไวรัสพืชในระยะแรกโดยใช้การจุ่มใบที่ย้อมสีลบจากพืชที่เป็นโรค พบว่าเมื่อใช้สีย้อมหนึ่งจะแสดงเฉพาะไวรัสทรงกลม และเมื่อใช้สีย้อมอีกแบบจะแสดงเฉพาะไวรัสรูปแท่ง ข้อสรุปที่ได้รับการยืนยันคือ พืชต้นนี้ติดเชื้อไวรัสสองชนิดผสมกัน ไม่ควรใช้การย้อมสีลบกับ สิ่งมีชีวิต ที่ก่อให้เกิดโรคติดเชื้อ ทั้งในระดับกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงและกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน เว้นแต่จะปฏิบัติตามมาตรการความปลอดภัยอย่างเคร่งครัด การย้อมสีลบมักเป็นวิธีการเตรียมตัวอย่างที่ไม่รุนแรงมาก ดังนั้นจึงไม่ลดโอกาสการติดเชื้อของผู้ปฏิบัติงาน

การใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่งผ่านโดยการย้อมสีเชิงลบยังประสบความสำเร็จในการศึกษาและระบุกลุ่มไขมันในน้ำ เช่นไลโปโซมแบบแผ่น (le) ไมเซลทรง กลมคว่ำ (M) และเฟสทรงกระบอกหกเหลี่ยม HII คว่ำ (H) (ดูรูป) ^{[ 5 ]}

• "การย้อมสีแบบลบสำหรับมือใหม่" . สืบค้นเมื่อ2009-06-06 .
• "การย้อมสีแบบลบ" สืบค้นเมื่อ2009-06-06{{cite web}}: CS1 maint: บริการเก็บถาวรที่เลิกใช้แล้ว ( ลิงก์ )