PstI เป็น เอนโดนิวคลีเอสจำกัดชนิดที่ 2 ที่แยกได้จากแบคทีเรียแกรมลบProvidencia stuartii

PstI ตัดDNAที่ลำดับการจดจำ 5′-CTGCA/G-3′ ทำให้เกิดชิ้นส่วนที่มีปลาย 3′ ที่ยึดเกาะได้^{[ 1 ]}การตัดนี้ทำให้เกิดปลายเหนียวที่มีความยาว 4 คู่เบส PstI มีฤทธิ์เร่งปฏิกิริยาในรูปของไดเมอร์ หน่วยย่อยทั้งสองมีความสัมพันธ์กันโดยแกนสมมาตร 2 เท่า ซึ่งในเชิงซ้อนกับสารตั้งต้นจะตรงกับแกนไดแอดของลำดับการจดจำมีน้ำหนักโมเลกุล 69,500 และประกอบด้วยสารตกค้างที่มีประจุบวก 54 ตัวและประจุลบ 41 ตัว^{[ 2 ]}

5'CTGCAG 3' 3'GACGTC 5' 

5'--CTGCA G--3' 3'--G ACGTC—5' 

ระบบการจำกัด/ดัดแปลง (R/M)ของ PstI ประกอบด้วยสองส่วน คือ เอนไซม์จำกัดที่ตัด DNA ต่างชาติ และเมทิลทรานสเฟอเรสที่ปกป้องสาย DNA ดั้งเดิมโดยการเติมหมู่เมทิลให้กับเบสอะดีนีนภายในลำดับการจดจำ การรวมกันของทั้งสองส่วนนี้เป็นกลไกการป้องกันไวรัสที่รุกราน^{[ 3 ]}เมทิลทรานสเฟอเรสและเอนโดนิวคลีเอสถูกเข้ารหัสเป็นโปรตีนสองตัวที่แยกจากกันและทำงานอย่างอิสระ ในระบบ PstI ยีนถูกเข้ารหัสบนสายตรงข้ามกัน ดังนั้นจึงต้องถอดรหัสแบบแยกจากกันจากโปรโมเตอร์ ที่แยกจากกัน ตำแหน่งเริ่มต้นการถอดรหัสอยู่ห่างกันเพียง 70 คู่เบส [ ^{2 ] ความ}ล่าช้าในการแสดงออกของเอนโดนิวคลีเอสเมื่อเทียบกับเมทิลเลสเกิดจากความแตกต่างโดยธรรมชาติของโปรตีนทั้งสอง^{[ 2 ]}เอนโดนิวคลีเอสเป็นไดเมอร์ซึ่งต้องใช้ขั้นตอนที่สองในการประกอบ ในขณะที่เมทิลเลสเป็นโมโนเมอร์

PstI ทำหน้าที่เทียบเท่ากับ BsuBI เอนไซม์ทั้งสองชนิดจดจำลำดับเป้าหมาย 5'CTGCAG ระบบเอนไซม์มีเมทิลทรานสเฟอเรสที่คล้ายกัน (ความเหมือนของกรดอะมิโน 41%) เอนโดนิวคลีเอสจำกัด (ความเหมือนของกรดอะมิโน 46%) และองค์ประกอบทางพันธุกรรมที่คล้ายกัน (ความเหมือนของนิวคลีโอไทด์ 58%) ^{[ 4 ]}ข้อสังเกตเหล่านี้ชี้ให้เห็นถึงประวัติ วิวัฒนาการ ร่วมกัน

เมื่อตรวจสอบการตัดสายคู่ของ DNA ที่ต้องการ เอนโดนิวคลีเอสจำกัด PstI จะจับกับ DNA พลาสมิด pSM1 ^{[ 5 ]}

PstI เป็นเอนไซม์ที่มีประโยชน์สำหรับการโคลนนิ่ง DNA เนื่องจากเป็นระบบคัดเลือกสำหรับการสร้างโมเลกุล DNA ลูกผสม^{[ 6 ]}จากนั้นโมเลกุล DNA ลูกผสมเหล่านี้สามารถถูกตัดที่ตำแหน่ง PstI ที่สร้างขึ้นใหม่ การใช้งานไม่ได้จำกัดอยู่แค่การโคลนนิ่งโมเลกุลเท่านั้น แต่ยังใช้ในการทำแผนที่ตำแหน่งจำกัด การระบุจีโนไทป์ การทำ Southern blotting โพลีมอร์ฟิซึมความยาวชิ้นส่วนจำกัด (RFLP) และ SNP อีกด้วย^{[ 1 ]}นอกจากนี้ยังเป็น เอนไซม์จำกัด ไอโซสคิโซเมอร์ SalPI จากStreptomyces albus P อีกด้วย ^{[ 7 ]}

PstI ตัด DNA pSM1 ที่บริสุทธิ์โดยเฉพาะอย่างยิ่งโดยไม่ได้รับอิทธิพลจากโครงสร้างเกลียวคู่ของสารตั้งต้น^{[ 8 ]}อย่างไรก็ตาม ยังไม่ทราบว่าผลของการตัดนี้เกิดขึ้นเมื่อจับกับไซต์การจดจำหรือการตัด DNA อัตราการตัดที่แตกต่างกันที่ไซต์จำกัดต่างๆ เกิดจากคุณสมบัติห้าประการของโครงสร้างคู่เกลียว ความใกล้ชิดกับปลายในโมเลกุล DNA เชิงเส้น ความแปรผันในลำดับ DNA ภายในไซต์การจดจำสำหรับเอนไซม์ ระยะทางสั้นระหว่างบริเวณของลำดับ DNA ที่ผิดปกติและไซต์การจดจำ และสุดท้ายคือโครงสร้างพิเศษ เช่น ลูปและแฮร์พิน ผลรวมของปัจจัยทั้งห้านี้อาจส่งผลต่อการเข้าถึงไซต์การจดจำของเอนไซม์จำกัด