การย้อมสีไตรโครมเป็น วิธี การย้อมสีทางจุลพยาธิวิทยา ที่ใช้ สีย้อมกรดสองชนิดขึ้นไปร่วมกับกรดโพลีแอซิดการย้อมสีนี้ช่วยแยกแยะเนื้อเยื่อโดยการย้อมสีให้แตกต่างกัน ทำให้ความคมชัดของรายละเอียดขนาดเล็กในเซลล์และเนื้อเยื่อ เพิ่มขึ้น ซึ่งทำให้มองเห็นได้ง่ายขึ้นเมื่อมองผ่านกล้องจุลทรรศน์

คำว่าไตรโครม (Trichrome)หมายถึง "สามสี" วิธีการย้อมสีแบบแรกที่ถูกอธิบายว่าเป็น "ไตรโครม" คือการ ย้อมสี ไตรโครมของมัลลอรี (Mallory's trichrome stain ) ซึ่งย้อมสีเม็ดเลือดแดงให้เป็นสีแดงเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อให้เป็นสีแดง และคอลลาเจนให้เป็นสีน้ำเงิน วิธีการย้อมสีไตรโครมอื่นๆ ได้แก่ การย้อมสีไตรโครม ของมาสสัน (Masson's trichrome stain) การย้อมสีไตรโครมของลิลลี่ ( Lillie's trichrome stain ) และ การย้อมสีไตรโครมของโก เมอรี (Gömöri trichrome stain )

หากไม่มีการย้อมสีไตรโครม การแยกแยะลักษณะหนึ่งจากอีกลักษณะหนึ่งอาจทำได้ยากมาก ตัวอย่างเช่น เนื้อเยื่อกล้ามเนื้อเรียบนั้นยากที่จะแยกแยะออกจากคอลลาเจน การย้อมสีไตรโครมสามารถทำให้เนื้อเยื่อกล้ามเนื้อมีสีแดง และเส้นใยคอลลาเจนมีสีเขียวหรือสีน้ำเงินการตรวจชิ้นเนื้อตับอาจมีเส้นใยคอลลาเจนละเอียดอยู่ระหว่างเซลล์ตับ และสามารถประมาณปริมาณคอลลาเจนได้จากวิธีการย้อมสี ปัจจุบันมีการใช้วิธีการย้อมสีไตรโครมเพื่อแยกแยะกล้ามเนื้อออกจากคอลลาเจน เซลล์อัลฟาของต่อมใต้สมองออกจากเซลล์เบตา ไฟบรินออกจากคอลลาเจน และไมโทคอนเดรียในชิ้นเนื้อกล้ามเนื้อแช่แข็งสด รวมถึงการใช้งานอื่นๆ ช่วยในการระบุการเพิ่มขึ้นของเนื้อเยื่อคอลลาเจน (เช่น การเปลี่ยนแปลงของพังผืด) เช่นในโรคตับแข็งและแยกแยะเนื้องอกที่เกิดขึ้นจากเซลล์กล้ามเนื้อและไฟโบรบลาสต์^{[ 1 ]}

เทคนิคการย้อมสีไตรโครมใช้ สีย้อมกรดสองชนิดขึ้นไปโดยปกติสีย้อมกรดจะย้อมโปรตีนพื้นฐานชนิดเดียวกัน แต่การใช้สีย้อมกรดตามลำดับจะช่วยควบคุมรูปแบบการย้อมสีได้ มีการใช้โพลีแอซิด (เช่นกรดฟอสโฟโมลิบดิกหรือกรดฟอสโฟทังสติก ) เพื่อกำจัดสีย้อมออกอย่างเลือกสรร เชื่อกันว่าโพลีแอซิดมีพฤติกรรมคล้ายสีย้อมที่มีโมเลกุล ขนาดใหญ่ กล่าวคือ มันสามารถแทนที่สีย้อมที่ถูกกำจัดออกจากคอลลาเจนได้ง่าย

โดยปกติแล้ว จะใช้สีย้อมสีแดงในกรดอะซิติกเจือจางก่อน เพื่อย้อมส่วนประกอบทั้งหมดให้ทั่ว จากนั้นจึงใช้กรดโพลีแอซิดเพื่อล้างสีย้อมสีแดงออกจากคอลลาเจนและส่วนประกอบอื่นๆ โดยวิธีการแทนที่ จากนั้นจึงใช้สีย้อมกรดตัวที่สอง (สีน้ำเงินหรือสีเขียว) ในกรดอะซิติกเจือจาง ซึ่งจะไปแทนที่กรดโพลีแอซิด ทำให้คอลลาเจนถูกย้อมเป็นสีที่ตัดกับสีย้อมเริ่มต้น หากต้องการย้อมเม็ดเลือดแดง จะใช้สีย้อมสีเหลืองหรือสีส้มที่มีโมเลกุลขนาดเล็กก่อนย้อมด้วยสีย้อมสีแดง โดยปกติจะใช้จากสารละลายอิ่มตัวในเอทานอล 80% และมักใช้ร่วมกับกรดพิคริก (ซึ่งเป็นสีย้อมชนิดหนึ่ง) และกรดโพลีแอซิด วิธีการเหล่านี้อาศัยความแตกต่างเล็กน้อยในปฏิกิริยาของเนื้อเยื่อต่อสีย้อม ความหนาแน่น การเข้าถึง และอื่นๆ

การย้อมสีไตรโครมแบบ หลายขั้นตอนซึ่งใช้สีย้อมและกรดโพลีแอซิดตามลำดับ เรียกว่า การย้อมสีไตรโครม แบบหลายขั้นตอน ส่วนวิธีการแบบ "ขั้นตอนเดียว" นั้น สีย้อมทั้งหมด—ไม่ว่าจะผสมกับกรดโพลีแอซิดหรือไม่ก็ตาม—จะถูกรวมไว้ในสารละลายเดียว หนึ่งในวิธีการย้อมสีไตรโครมแบบขั้นตอนเดียวที่เก่าแก่ที่สุดคือ วิธีของแวน กีสัน ซึ่งย้อมกล้ามเนื้อและ ไซโต พลาซึมเป็นสีเหลือง และคอลลาเจนเป็นสีแดง อีกวิธีหนึ่งคือการย้อมสีไตรโครมแบบโกเมอรีซึ่งเลียนแบบการย้อมสีไตรโครมของมาสสันได้อย่างใกล้เคียง ในวิธีการ "เยลโลว์โซลฟ์" นั้น จะใช้สีย้อมสีแดงในกรดอะซิติกเจือจางก่อน จากนั้นจึงทำการอบแห้งชิ้นเนื้ออย่างละเอียดเพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีความชื้นหลงเหลืออยู่ จากนั้นจึงแทนที่สีย้อมสีแดงด้วยสีย้อมสีเหลืองในตัวทำละลาย เช่น เซลโลโซลฟ์ (2-เอทอกซี-เอทานอล) ชื่อเยลโลว์โซลฟ์เป็นการผสมคำระหว่างคำว่าสีเหลืองและเซลโลโซลฟ์ ฟลอกซีน-ทาร์ทราซีนของเลนดรัมสำหรับการย้อมส่วนประกอบภายในเซลล์เป็นตัวอย่างหนึ่งของการย้อมสีเยลโลว์โซลฟ์

สีย้อมที่ใช้ในการย้อมแบบไตรโครม ได้แก่:

สีแดง

กรดฟูชิน , ไซลิดีนปอนโซ, โครโมโทรป 2R, บีบริชสการ์เล็ต , พอนซ์โซ 6R, ฟลอกซีน

สีน้ำเงินและสีเขียว

สีเขียวอ่อน SF สีเหลืองอมเขียว, Fast Green FCF , เมทิลบลู , วอเตอร์บลู

สีเหลือง

กรดพิคริก , ออเรนจ์ จี , มาร์ติอุส เยลโลว์ , ทาร์ทราซีน , มิลลิ่ง เยลโลว์

• การย้อมสีแบบกระจาย
• กล้องจุลทรรศน์
• กล้องจุลทรรศน์แบบคอนทราสต์เฟส

• โปรโตคอลไตรโครมของมาสสัน