การย้อมสีแบบ โรมานอฟสกี เป็น เทคนิค การย้อมสี ต้นแบบที่ เป็นต้นกำเนิดของการย้อมสีที่แตกต่างกันแต่คล้ายคลึงกันหลายชนิดซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในโลหิตวิทยา (การศึกษาเลือด) และ เซลล์ วิทยา (การศึกษาเซลล์ที่เป็นโรค) การย้อมสีแบบโรมานอฟสกีใช้เพื่อแยกความแตกต่างของ เซลล์สำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ในตัวอย่างทางพยาธิวิทยา โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ฟิล์มเลือดและไขกระดูก^{[ 1 ]}และเพื่อตรวจหาปรสิตเช่นมาลาเรียในเลือด^{[ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]}

เทคนิคการย้อมสีนี้ตั้งชื่อตามแพทย์ชาวรัสเซียชื่อDmitri Leonidovich Romanowsky (1861–1921) ซึ่งเป็นหนึ่งในคนแรกๆ ที่ตระหนักถึงศักยภาพในการใช้เป็นสีย้อมเลือด^{[ 6 ]}

สีย้อมที่เกี่ยวข้องหรือได้มาจากสีย้อมประเภทโรมานอฟสกี ได้แก่สีย้อม จี มซา สีย้อมเจนเนอร์ สีย้อมไรท์สีย้อมฟิลด์ สีย้อมเมย์-กรุนวัล ด์ สีย้อม ปัปเพนไฮม์ และ สีย้อม ลีชแมน สีย้อมเหล่านี้แตกต่างกันในวิธีการและสารเติมแต่ง และชื่อของสีย้อมเหล่านี้มักทำให้เกิดความสับสนในการใช้งานจริง

คุณค่าของการย้อมสีแบบโรมานอฟสกีอยู่ที่ความสามารถในการสร้างเฉดสีที่หลากหลาย ทำให้สามารถแยกแยะส่วนประกอบของเซลล์ได้ง่าย ปรากฏการณ์นี้เรียกว่าปรากฏการณ์โรมานอฟสกีหรือโดยทั่วไปเรียกว่าเมตาโครมาเซีย^{[ 7 ]}

อีโอซินซึ่งเป็นส่วนประกอบของสีย้อม เป็นสาเหตุที่ทำให้เม็ดเลือดแดงและเม็ดเล็กๆ ภายในไซโตพลาสซึมของเม็ดเลือดขาวชนิดอีโอซิโนฟิลมี สีชมพูอมส้ม

ในปี พ.ศ. 2434 Romanowsky ^{[ 8 ] [ 9 ] [ 10 ]}ได้พัฒนาสีย้อมโดยใช้ส่วนผสมของอีโอซิน (โดยทั่วไปคืออีโอซิน Y ) และสารละลายเมทิลีนบลู ที่เก็บไว้นาน ซึ่งก่อให้เกิดเฉดสีที่ไม่สามารถอธิบายได้ด้วยส่วนประกอบของสีย้อมเพียงอย่างเดียว: เฉดสีม่วงที่โดดเด่นในโครมาตินของนิวเคลียสของเซลล์และภายในเม็ดในไซโตพลาสซึม ของ เม็ดเลือดขาวบางชนิดปรากฏการณ์นี้จึงเป็นที่รู้จักในชื่อปรากฏการณ์ Romanowsky ^{[ 11 ] [ 12 ] [ 6 ] [ 13 ] [ 4 ]}อีโอซินและเมทิลีนบลูบริสุทธิ์เพียงอย่างเดียว (หรือผสมกัน) ไม่ได้ก่อให้เกิดปรากฏการณ์ Romanowsky ^{[ 13 ] [ 4 ]}และสีย้อมที่ออกฤทธิ์ซึ่งก่อให้เกิดปรากฏการณ์นี้ในปัจจุบันถือว่าเป็นสีย้อมอะซูร์บีและอีโอซิน^{[ 14 ] [ 3 ] [ 13 ]}

สีย้อมแบบโรมานอฟสกีสามารถทำได้จากส่วนผสมของสีย้อมบริสุทธิ์ หรือจากเมทิลีนบลู ที่ผ่านกระบวนการ ออกซิเดชั่นแบบดี เมทิลเลชั่น ซึ่งส่งผลให้เมทิลีนบลูแตกตัวเป็นสีย้อมอื่นๆ หลายชนิด ซึ่งบางชนิดจำเป็นต่อการสร้างเอฟเฟกต์โรมานอฟสกี^{[ 15 ] [ 4 ]}เมทิลีนบลูที่ผ่านกระบวนการออกซิเดชั่นนี้เรียกว่า "เมทิลีนบลูหลายสี" ^{[ 15 ] [ 4 ]} เม ทิลีนบลูหลายสีอาจมีสีย้อมมากถึง 11 ชนิด รวมถึงเมทิลีนบลู , อะซูร์เอ , อะซูร์บี, อะซูร์ซี, ไทโอนีน , เมทิลีนไวโอเลตเบิร์นทีเซน, เมทิลไทโอโนลีน และไทโอโนลีน^{[ 4 ]}องค์ประกอบที่แน่นอนของเมทิลีนบลูหลายสีขึ้นอยู่กับวิธีการที่ใช้ และแม้แต่ชุดสีย้อมจากผู้ผลิตรายเดียวกันก็อาจมีองค์ประกอบที่แตกต่างกันได้^{[ 15 ]}

วิธีการออกซิเดชันอย่างรวดเร็วทั่วไปใช้การเพิ่มค่า pH ของสารละลายด้วยโพแทสเซียมคาร์บอเนตและต้ม ซึ่งจะนำออกซิเจน ในบรรยากาศเข้า มา^{[ 16 ]}นอกจากนี้ยังมีการใช้วิธีการอื่นๆ เช่น การออกซิเดชันในตัวกลางที่เป็นกรดด้วยไอออนไดโครเมต

แม้ว่าอะซูร์บีและอีโอซินจะแสดงให้เห็นว่าเป็นส่วนประกอบที่จำเป็นในการสร้างเอฟเฟกต์โรมานอฟสกี^{[ 14 ] [ 3 ] [ 13 ]}แต่สีย้อมเหล่านี้ในรูปแบบบริสุทธิ์ไม่ได้ถูกนำมาใช้ในการเตรียมสารละลายย้อมสีเสมอไป^{[ 4 ]}แหล่งที่มาดั้งเดิมของอะซูร์บี (หนึ่งในผลิตภัณฑ์ออกซิเดชันของเมทิลีนบลู) มาจากสารละลายเมทิลีนบลูหลายสี ซึ่งได้รับการบำบัดด้วยสารออกซิไดซ์หรือปล่อยให้มีอายุตามธรรมชาติในกรณีของโรมานอฟสกี^{[ 3 ] [ 13 ]}เอิร์นส์ มาลาโชว์สกี ในปี 1891 เป็นคนแรกที่ตั้งใจผสมสีเมทิลีนบลูหลายสีเพื่อใช้ในการย้อมสีแบบโรมานอฟสกี^{[ 15 ] [ 17 ]}

สีย้อมของไรท์สามารถใช้ได้โดยลำพังหรือใช้ร่วมกับสีย้อมของจีมซา ซึ่งเรียกว่าสีย้อมไรท์-จีมซา^{[ 1 ]}สีย้อมของไรท์ตั้งชื่อตามเจมส์ โฮเมอร์ ไรท์ผู้ซึ่งในปี 1902 ^{[ 18 ]}ได้ตีพิมพ์วิธีการใช้ความร้อนเพื่อผลิตเมทิลีนบลูหลายสี ซึ่งผสมกับอีโอซิน Y ^{[ 19 ] [ 20 ] [ 12 ] [ 1 ]}เมทิลีนบลูหลายสีจะถูกผสมกับอีโอซินและปล่อยให้ตกตะกอน ก่อให้เกิดอีโอซิเนตซึ่งจะถูกละลายใหม่ในเมทานอล [ ^{4 ] การ}เพิ่มจีมซาลงในสีย้อมของไรท์จะเพิ่มความสว่างของสี "ม่วงแดง" ของเม็ดไซโตพลาสมิก^{[ 1 ] [ 12 ]}สีย้อมไรท์และไรท์-กีมซาเป็นสีย้อมประเภทโรมานอฟสกีสองชนิดที่ใช้กันทั่วไปในสหรัฐอเมริกา และส่วนใหญ่ใช้สำหรับการย้อมฟิล์มเลือดและไขกระดูก^{[ 12 ] [ 1 ]}

สีย้อมของเจนเนอร์ใช้ในการย้อมสไลด์เลือดด้วยกล้องจุลทรรศน์สีย้อมนี้มีสีน้ำเงินเข้มและทำให้เห็นนิวเคลียสได้อย่างชัดเจน

สีย้อม Giemsa ประกอบด้วย "Azure II" และ eosin Y โดยใช้เมทานอลและกลีเซอรอลเป็นตัวทำละลาย^{[ 15 ]}เชื่อกันว่า "Azure II" เป็นส่วนผสมของ azure B (ซึ่ง Giemsa เรียกว่า "azure I") และเมทิลีนบลู แม้ว่าองค์ประกอบที่แน่นอนของ "azure I" จะถือเป็นความลับทางการค้า [ ^{4 ] [ 15 ] สูตร}ที่เทียบเคียงได้โดยใช้สีย้อมที่เป็นที่รู้จักได้รับการตีพิมพ์และมีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ สีย้อม Giemsa ถือเป็นสีย้อมมาตรฐานสำหรับการตรวจจับและระบุปรสิตมาลาเรีย^{[ 5 ]}

สีย้อม May-Grünwald-Giemsa ใช้สำหรับการย้อมสไลด์ที่ได้จากการเจาะดูดเนื้อเยื่อด้วยเข็มขนาดเล็กในห้องปฏิบัติการพยาธิวิทยา เพื่อวินิจฉัยเซลล์มะเร็ง

วิธีนี้เป็นการผสมผสานระหว่างการย้อมสี May-Grünwald และการย้อมสี Giemsa

ในปี พ.ศ. 2444 วิลเลียม ลีชแมน^{[ 21 ]}ได้พัฒนาสีย้อมที่คล้ายกับของหลุยส์ เจนเนอร์ แต่เปลี่ยนจากเมทิลีนบลูบริสุทธิ์เป็นเมทิลีนบลูหลายสี^{[ 19 ] [ 15 ] [ 4 ]}สีย้อมของลีชแมนเตรียมจากอีโอซิเนตของเมทิลีนบลูหลายสีและอีโอซิน Y โดยใช้เมทานอลเป็นตัวทำละลาย^{[ 4 ​​]}

การย้อมสีภาคสนามใช้สำหรับย้อมฟิล์มเลือดข้นเพื่อตรวจหาปรสิต มาลาเรีย

การย้อมสีแบบโรมานอฟสกีใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจเลือด ในรูปแบบของฟิล์มเลือดและในการ ตรวจ ชิ้นเนื้อไขกระดูก และสเมียร์จากการดูด ด้วยกล้องจุลทรรศน์ ^{[ 1 ] [ 22 ]}การตรวจทั้งเลือดและไขกระดูกมีความสำคัญในการวินิจฉัยโรคเลือดหลายชนิด^{[ 1 ] [ 22 ]}ในสหรัฐอเมริกา การย้อมสีแบบโรมานอฟสกีชนิดไรท์และไรท์-จีมซาใช้กันอย่างแพร่หลาย^{[ 1 ]}ในขณะที่ในยุโรปมักใช้การย้อมสีจีมซา^{[ 1 ]}

ในบรรดาสีย้อมประเภทโรมานอฟสกี สีย้อมจีมซามีความสำคัญเป็นพิเศษใน การตรวจจับ และระบุปรสิตมาลาเรียในตัวอย่างเลือด^{[ 5 ] [ 15 ]}การทดสอบการตรวจหาแอนติเจนมาลาเรียเป็นทางเลือกแทนการย้อมสีและการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ของฟิล์มเลือดเพื่อตรวจหามาลาเรีย^{[ 5 ]}

สีย้อมประเภท Romanowsky ยังใช้สำหรับการย้อมตัวอย่าง เซลล์ พยาธิวิทยาเช่น ตัวอย่างที่ได้จาก การเจาะดูด ^ด้วยเข็มละเอียดและน้ำไขสันหลังจากการเจาะเอว [ ^{23 ]}

แม้ว่าจะมีการถกเถียงกันว่าใครสมควรได้รับเครดิตสำหรับวิธีการย้อมสีทั่วไปนี้ แต่การใช้งานที่เป็นที่นิยมได้ยกให้เป็นผลงานของDmitri Leonidovich Romanowsky ^{[ 14 ] [ 17 ] [ 19 ]}

ในช่วงทศวรรษ 1870 Paul Ehrlichใช้ส่วนผสมของสีย้อมที่เป็นกรดและเบส รวมถึงกรดฟูชซิน (สีย้อมกรด) และเมทิลีนบลู (สีย้อมเบส) เพื่อตรวจสอบฟิล์มเลือด^{[ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ] [ 17 ]}ในปี 1888 Cheslav Ivanovich Chenzinsky ใช้เมทิลีนบลู แต่เปลี่ยนกรดฟูชซินที่ Ehrlich ใช้เป็นอีโอซิน^{[ 14 ] [ 26 ] [ 27 ]}การผสมสีของ Chenzinsky สามารถย้อม ปรสิต มาลาเรีย (สมาชิกของสกุลPlasmodium ) ได้ ^{[ 27 ] [ 19 ]}ทั้งสีของ Ehrlich และ Chenzinsky ไม่ได้ทำให้เกิดผลแบบ Romanowsky เนื่องจากเมทิลีนบลูที่พวกเขาใช้ไม่ใช่สีหลายสี^{[ 17 ]}

ในปี พ.ศ. 2433 Dmitri Romanowsky ได้ตีพิมพ์ผลการค้นพบเบื้องต้นของสีย้อมเลือดของเขา (ส่วนผสมของเมทิลีนบลูที่เก็บไว้นานและอีโอซิน) รวมถึงผลลัพธ์เมื่อนำไปใช้กับเลือดที่ติดเชื้อมาลาเรีย^{[ 6 ]}การใช้เมทิลีนบลูหลายสีนี้ทำให้สีย้อมของ Romanowsky (และสูตรที่ตามมา) แตกต่างจากของ Ehrlich และ Chenzinsky ซึ่งขาดสีม่วงที่เกี่ยวข้องกับผลของ Romanowsky ^{[ 17 ]}งานตีพิมพ์ของ Romanowsky ในปี พ.ศ. 2433 ไม่ได้รวมคำอธิบายเกี่ยวกับวิธีการดัดแปลงสารละลายเมทิลีนบลูของเขา^{[ 6 ] [ 17 ]}แต่ในวิทยานิพนธ์ปริญญาเอกของเขาในปี พ.ศ. 2434 เขาได้อธิบายว่าเมทิลีนบลูใช้ได้ดีที่สุดหลังจากที่เชื้อราเริ่มก่อตัวบนพื้นผิว^{[ 6 ] [ 17 ]}นอกเหนือจากการใช้สารละลายเมทิลีนบลูที่เก็บไว้นาน สีย้อมของ Romanowsky นั้นอิงตามเทคนิคการย้อมของ Chenzinsky ^{[ 17 ]}การที่โรมานอฟสกีใช้วิธีการของเขาในการศึกษาปรสิตมาลาเรียได้รับการระบุว่าเป็นผลมาจากความสนใจอย่างต่อเนื่องในวิธีการย้อมสีของเขา^{[ 25 ]}

Ernst Malachowsky ได้รับการยกย่องว่าสังเกตเห็นการผสมสีย้อมแบบเดียวกันกับ Dmitri Romanowsky ในปี 1891 โดยอิสระ^{[ 6 ] [ 13 ]}แม้ว่าเขาจะได้รับการยกย่องว่าเป็นคนแรกที่ทำเช่นนั้นก็ตาม^{[ 17 ] [ 19 ]} Malachowsky เป็นคนแรกที่ใช้สารละลายเมทิลีนบลูที่มีสีหลายสีโดยเจตนา^{[ 15 ]}ซึ่ง Malachowsky ทำได้โดยการเติมบอแรกซ์ ลง ในส่วนผสมสำหรับการย้อมสี^{[ 17 ]}มีรายงานว่า Malachowsky ได้สาธิตการย้อมสีในวันที่ 15 มิถุนายน 1890 และในปีเดียวกันนั้นก็ได้ตีพิมพ์บทความ "อธิบายการสาธิตต่อสาธารณะของเขา" ^{[ 19 ]}ทั้งวิธีการของ Romanowsky และ Malachowsky สามารถย้อมนิวเคลียสและไซโตพลาสซึมของปรสิตมาลาเรีย ได้ ในขณะที่ก่อนหน้านี้สีย้อมที่ใช้ย้อมได้เฉพาะไซโตพลาสซึมเท่านั้น^{[ 19 ]}

ในปี พ.ศ. 2442 Louis Leopold Jenner ได้พัฒนาวิธีการย้อมเมทิลีนบลูและอีโอซินที่เสถียรยิ่งขึ้นโดยการเก็บตะกอนที่เกิดขึ้นในส่วนผสมที่มีน้ำเป็นตัวทำละลายและละลายใหม่ในเมทานอล [ ^{27 ] [ 15 ] [ 4 ] การ}ย้อมแบบโรมานอฟสกีที่เตรียมจากตะกอนที่เก็บได้บางครั้งเรียกว่าอีโอซิเนต [ ^{4 ] นอกจาก}การเพิ่มความเสถียรของการย้อมแล้ว การใช้เมทานอลในการย้อมของ Jennerยังมีผลในการตรึงตัวอย่างเลือด^{[ 4 ]}แม้ว่าวิธีการย้อมของ Jenner จะไม่ทำให้เกิดผลแบบโรมานอฟสกีก็ตาม^{[ 27 ] [ 19 ] [ 15 ]}

ในปี พ.ศ. 2435 Richard May และLudwig Grünwaldได้ตีพิมพ์เวอร์ชันของคราบ (ปัจจุบันรู้จักกันในชื่อคราบ May–Grünwald ) ซึ่งคล้ายกับเวอร์ชันที่ Jenner เสนอในปี พ.ศ. 2442 และเช่นเดียวกันก็ไม่ก่อให้เกิดเอฟเฟกต์ Romanowsky ^{[ 27 ] [ 19 ] [ 15 ]}

ในปี พ.ศ. 2444 ทั้งKarl ReuterและWilliam Leishman ^{[ 21 ]}ได้พัฒนาสีย้อมที่ผสมผสานการใช้แอลกอฮอล์เป็นตัวทำละลายของ Louis Jenner และการใช้เมทิลีนบลูหลายสีของ Malachowsky ^{[ 19 ] [ 15 ] [ 4 ]}สีย้อมของ Reuter แตกต่างจากของ Jenner ตรงที่ใช้เอทิลแอลกอฮอล์แทนเมทานอล และสีย้อมของ Leishman แตกต่างจากของ Jenner ตรงที่ใช้eosin Bแทนeosin Y ^{[ 19 ] [ 4 ]}

ในปี พ.ศ. 2445 เจมส์ โฮเมอร์ ไรท์ ได้ตีพิมพ์ ^{[ 18 ]}วิธีการใช้ความร้อนในการย้อมสีเมทิลีนบลู ซึ่งเขาผสมกับอีโอซิน Y เทคนิคนี้เรียกว่าการย้อมสีของไรท์^{[ 19 ] [ 20 ]}

ชื่อ ของ Gustav Giemsaยังเกี่ยวข้องกับสีย้อมนี้ด้วย เนื่องจากเขาได้รับการยกย่องว่าได้ตีพิมพ์สูตรและขั้นตอนที่เป็นประโยชน์ในปี 1902 ^{[ 13 ] [ 6 ] [ 25 ]} Giemsa พยายามใช้สีย้อมบริสุทธิ์หลายชนิดผสมกัน แทนที่จะใช้สารละลายเมทิลีนบลูหลายสี ซึ่งมีองค์ประกอบที่แปรผันได้สูง^{[ 20 ] [ 19 ] [ 15 ]} Giemsa ขายสิทธิ์ในการผลิตสีย้อมของเขา แต่ไม่เคยตีพิมพ์รายละเอียดทั้งหมดเกี่ยวกับวิธีการผลิต^{[ 19 ]}แม้ว่าจะเชื่อกันว่าเขาใช้ส่วนผสมของอะซูร์บีและเมทิลีนบลู^{[ 15 ]} Giemsa ได้ตีพิมพ์การดัดแปลงสีย้อมของเขาหลายครั้งระหว่างปี 1902 ถึง 1934 ในปี 1904 ^{[ 28 ]}เขาแนะนำให้เติมกลีเซอรีนลงในสีย้อมของเขาพร้อมกับเมทานอล เพื่อเพิ่มความเสถียร^{[ 22 ] [ 19 ]}

ผงย้อมสี Giemsa ที่ผลิตในเยอรมนีถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในสหรัฐอเมริกาจนกระทั่งการจัดหาหยุดชะงักในช่วงสงครามโลกครั้งที่ 1ซึ่งทำให้มีการใช้วิธีของ James Homer Wright สำหรับการย้อมสีเมทิลีนบลูเพิ่มมากขึ้น^{[ 19 ] [ 1 ]}

• รอยเปื้อนของหลิว
• การทดสอบการตรวจหาแอนติเจนของเชื้อมาลาเรีย
• การย้อมสีปาปานิโคโล
• การย้อมสี (ชีววิทยา)