อ่าน 6 นาที
แบคแมม
การถ่ายทอดยีนของ แบค คูโลไวรัสเข้าสู่ เซลล์สัตว์เลี้ยงลูก ด้วยนม (BacMam) คือการใช้ แบคคูโลไวรัส ในการส่ง ยีน ไปยังเซลล์สัตว์ เลี้ยงลูกด้วยนม [ 1 ] [ 2 ]...
แบคแมม

การถ่ายทอดยีนของแบคคูโลไวรัสเข้าสู่ เซลล์สัตว์เลี้ยงลูก ด้วยนม (BacMam) คือการใช้แบคคูโลไวรัสในการส่งยีนไปยังเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม[ 1 ] [ 2 ]แบคคูโลไวรัสเป็นไวรัสของแมลงซึ่งโดยทั่วไปไม่สามารถติดเชื้อเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมได้ อย่างไรก็ตาม พวกมันสามารถถูกดัดแปลงให้แสดงโปรตีนใน เซลล์สัตว์ เลี้ยงลูกด้วยนมได้ แบคคูโลไวรัสที่ไม่ถูกดัดแปลงสามารถเข้าสู่เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมได้ แต่ยีนของพวกมันจะไม่ถูกแสดงออกเว้นแต่จะ มีการรวม โปรโมเตอร์ของ สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่สามารถจดจำได้ ไว้ด้านหน้าของยีนที่สนใจ ทั้งแบคคูโลไวรัสที่ไม่ถูกดัดแปลงและแบคคูโลไวรัสที่ถูกดัดแปลงไม่สามารถจำลองตัวเองในมนุษย์ ได้ ทำให้พวกมันไม่ก่อให้เกิดการติดเชื้อ
การถ่ายโอนยีนโดยใช้ไวรัสบาคุโลได้รับการพัฒนาโดย ดร. Frederick M. Boyce [ 3 ]วิธีนี้ได้รับความนิยมอย่างแพร่หลายเนื่องจากมีข้อดีบางประการเมื่อเทียบกับวิธีการถ่ายโอนยีน แบบอื่น [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ]พบว่า BacMam มีความเสถียรและความยืดหยุ่นมากกว่าวิธีการใช้เซลล์ไลน์ แบบอื่น [ 7 ]ซึ่งส่งผลให้มีการนำมาใช้เป็นเทคนิคการถ่ายโอนยีนมาตรฐาน
คุณสมบัติทั่วไป
เทคโนโลยีการส่งยีน BacMam เป็นระบบการแสดงออกชั่วคราว ซึ่งอำนวยความสะดวกในการแสดงออกของผลิตภัณฑ์ยีน มีช่วงการถ่ายทอดที่กว้าง รวมถึงเซลล์หลักหลายประเภทและเซลล์ต้นกำเนิด [ 8 ] จีโนมของไวรัสบาคุโลมีศักยภาพสูงในการแทรกยีนต่างประเทศ โดยมีการทดสอบการแทรกได้สำเร็จถึง 38 kb [ 9 ]การส่งยีนหลายตัวพร้อมกันไปยังเซลล์เดียวกันนั้นเป็นไปได้[ 10 ]อนุภาค BacMam มีผลกระทบต่อเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมน้อยมากหรือแทบไม่มีเลยเมื่อสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์[ 11 ]ระดับการแสดงออกของยีนสามารถปรับได้โดยปริมาณไวรัสหรือการเติมสารเคมีโดยใช้สารยับยั้งฮิสโตนดีอะเซทิเลส[ 12 ]การถ่ายทอดยีนเข้าสู่เซลล์ทำได้โดยการเติมของเหลวเท่านั้น ทำให้ BacMam เหมาะสำหรับวิธีการอัตโนมัติ ไวรัสมีความเสถียรเมื่อเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 °C ในที่มืดเป็นเวลานาน[ 13 ]
ข้อควรพิจารณาด้านความปลอดภัยทางชีวภาพ
ไวรัสบาคุโลเป็น สารก่อ โรคกลุ่มเสี่ยงที่ 1ซึ่งถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายมานานกว่า 25 ปีสำหรับการผลิตโปรตีน จากเซลล์แมลง [ 14 ]ไวรัสบาคุโลผลิตขึ้นในเซลล์แมลงและไม่สามารถจำลองตัวเองในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมได้ และไม่เป็นที่ทราบกันว่าก่อให้เกิดโรคในผู้ใหญ่ที่มีสุขภาพดี นอกจากนี้ ไวรัส BacMam ยังถูกทำลายโดยคอมพลีเมนต์ของมนุษย์ ซึ่งช่วยลดความเสี่ยงต่อนักวิจัย ไวรัสที่ใช้ในห้องปฏิบัติการไม่สามารถจำลองตัวเองในแมลงได้ ดังนั้นจึงไม่มีภัยคุกคามต่อสิ่งแวดล้อมหากอนุภาคเหล่านี้ถูกปล่อยสู่สิ่งแวดล้อม[ 15 ] [ 16 ]
การเข้าสู่ไวรัส
การศึกษาเกี่ยวกับการเข้าสู่เซลล์ มะเร็งตับของมนุษย์โดยไวรัสบาคุโลแสดงให้เห็นว่า BacMam เข้าสู่เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมผ่าน เอนโดไซ โทซิส ที่อาศัยคลัทริน และอาจผ่านไมโครพิโนไซโทซิส[ 17 ]การศึกษาเพิ่มเติมชี้ให้เห็นว่าคาเวโอเลมีส่วนเกี่ยวข้องกับการเข้าสู่เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมของไวรัสบาคุโล[ 18 ]
การตอบสนองของเซลล์เจ้าบ้าน
เพื่อให้มีประสิทธิภาพ เทคโนโลยีการส่งยีนต้องไม่รบกวนการทำงานของเซลล์ตามปกติ การทดสอบ ความเป็นพิษต่อเซลล์และการวิเคราะห์ทรานสคริปโตมในเซลล์ HEK ของมนุษย์ (HEK293) เผยให้เห็นว่าการถ่ายทอดไวรัสบาคุโลไม่เป็นพิษต่อเซลล์และไม่ก่อให้เกิดการตอบสนองการถอดรหัสที่แตกต่างกัน[ 19 ] ในทำนองเดียวกัน เซลล์ชวานที่ติดเชื้อ ยังคงรักษา ลักษณะทางสัณฐานวิทยาและโมเลกุลเฉพาะของตนไว้และสามารถแยกแยะในหลอดทดลองและแสดง เครื่องหมาย การสร้างไมอีลิน P0 ได้ การใช้เทคโนโลยีไมโครอาร์เรย์ดีเอ็นเอเสริม (cDNA) เพื่อตรวจสอบโปรไฟล์การแสดงออกของยีนในเซลล์ โดยรวมในหลอดทดลองและในร่างกายในสมองหนูเซลล์แอสโทรไซต์ ของมนุษย์ที่เพาะเลี้ยง และเซลล์ประสาทของมนุษย์หลังจากการถ่ายทอดไวรัส พบการตอบสนองต่อไวรัสของโฮสต์[ 20 ] ยีนที่เกี่ยวข้องส่วนใหญ่เป็นยีนที่เกี่ยวข้องกับภูมิคุ้มกัน โดยกำเนิดรวมถึงยีนหลายตัวที่เกี่ยวข้องกับเส้นทางการส่งสัญญาณตัวรับ Toll-like และปฏิสัมพันธ์ระหว่างไซโตไคน์กับตัวรับ ไซโต ไคน์
การใช้งาน
การผลิตทางชีวภาพ
BacMam ถูกนำมาใช้เพื่อผลิตโปรตีนในปริมาณมากโดยใช้เซลล์ HEK293 ในระบบไบโอรีแอคเตอร์แบบเส้นใยกลวง[ 21 ]
การคัดกรองความเร็วสูง
สามารถศึกษาเภสัชวิทยาของตัวรับที่เชื่อมโยงกับโปรตีน G โดยใช้เทคโนโลยี BacMam ในการประยุกต์ใช้การค้นพบยา[ 22 ]
กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์
สารรีเอเจนต์สำหรับการติดฉลากออร์แกเนลล์คืออนุภาค BacMam ที่มีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์สำหรับการติดฉลากออร์แกเนลล์และโครงสร้างย่อยของเซลล์อื่นๆ[ 23 ]การติดฉลากไมโตคอนเดรียเดี่ยวด้วยโปรตีนเรืองแสงสีเขียวที่กำหนดเป้าหมายไปยังไมโตคอนเดรีย[ 24 ]
การวิเคราะห์การกระตุ้นตัวรับ/เส้นทาง
ได้มีการดำเนินการกำหนดลักษณะเฉพาะของการกระตุ้นตัวรับเซโรโทนินผ่านฟิวชั่น GFP ที่ส่งโดย BacMam ไปยังสารตั้งต้นไคเนส[ 25 ]
ชีววิทยาโครงสร้าง
ระบบ BacMam สามารถใช้ในการผลิตไกลโคโปรตีนที่ละลายได้และอยู่ในเยื่อหุ้มเซลล์สำหรับการศึกษาโครงสร้าง[ 26 ]
ดูเพิ่มเติม
ลิงก์ภายนอก
- ระบบ BacMam
สรุปเนื้อหา
ข้อมูลสำคัญจากบทความ
ข้อมูลสำคัญเกี่ยวกับ แบคแมม
การถ่ายทอดยีนของ แบค คูโลไวรัสเข้าสู่ เซลล์สัตว์เลี้ยงลูก ด้วยนม (BacMam) คือการใช้ แบคคูโลไวรัส ในการส่ง ยีน ไปยังเซลล์สัตว์ เลี้ยงลูกด้วยนม [ 1 ] [ 2 ]...
คุณสมบัติทั่วไป
เทคโนโลยีการส่งยีน BacMam เป็นระบบการแสดงออกชั่วคราว ซึ่งอำนวยความสะดวกในการแสดงออกของผลิตภัณฑ์ยีน มีช่วงการถ่ายทอดที่กว้าง รวมถึงเซลล์หลักหลายประเภทและ เซลล์ต้นกำเนิด [ 8 ] จี โนมของไวรัสบาคุโลมีศักยภาพสูงในการแทรกยีนต่างประเทศ...
ข้อควรพิจารณาด้านความปลอดภัยทางชีวภาพ
ไวรัสบาคุโลเป็น สารก่อ โรคกลุ่มเสี่ยงที่ 1 ซึ่งถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายมานานกว่า 25 ปีสำหรับการ ผลิตโปรตีน จากเซลล์แมลง [ 14 ] ไวรัสบาคุโลผลิตขึ้นในเซลล์แมลงและไม่สามารถจำลองตัวเองในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมได้...
การเข้าสู่ไวรัส
การศึกษาเกี่ยวกับการเข้าสู่เซลล์ มะเร็งตับ ของมนุษย์โดยไวรัสบาคุโลแสดงให้เห็นว่า BacMam เข้าสู่เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมผ่าน เอนโดไซ โทซิส ที่อาศัยคลัทริน และอาจผ่าน ไมโครพิโนไซโทซิ ส [ 17 ] การศึกษาเพิ่มเติมชี้ให้เห็นว่า คาเวโอเล...