น้ำยาของเอลแมน
รีเอเจนต์ของ Ellman (5,5′-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid) หรือDTNB ) เป็น สารเคมี ที่ทำให้เกิดสีซึ่งใช้ในการหาปริมาณหรือความเข้มข้นของ กลุ่ม ไทออลในตัวอย่าง[ 3 ] ได้รับการพัฒนาโดย George L. Ellman
การตระเตรียม
ในเอกสารต้นฉบับของ Ellman [ 3 ]เขาเตรียมรีเอเจนต์นี้โดยการออกซิไดซ์ 2-ไนโตร-5-คลอโรเบนซาลดีไฮด์ให้เป็นกรดคาร์บอกซิลิก นำไทออลเข้ามาโดยใช้โซเดียมซัลไฟด์และเชื่อมต่อโมโนเมอร์โดยการออกซิไดซ์ด้วยไอโอดีนปัจจุบัน รีเอเจนต์นี้หาซื้อได้ง่ายในเชิงพาณิชย์
การทดสอบของเอลแมน
สารกลุ่มไทออลทำปฏิกิริยากับสารประกอบนี้ โดยจะแยกพันธะไดซัลไฟด์ ออก เพื่อให้ได้ 2-ไนโตร-5-ไทโอเบนโซเอต (TNB − ) ซึ่งจะแตกตัวเป็นไอออนลบ TNB 2−ในน้ำที่ค่า pH เป็นกลางและด่าง ไอออน TNB 2− นี้ มีสีเหลือง
ปฏิกิริยาของ DTNB กับไทออล (R-SH)
ปฏิกิริยานี้เกิดขึ้นอย่างรวดเร็วและเป็นไปตามสัดส่วนทางเคมี โดยการเติมไทออล 1 โมลจะปลดปล่อย TNB 1 โมลออกมา TNB 2−จะถูกวัดปริมาณในเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์โดยการวัดการดูดกลืนแสงที่มองเห็นได้ที่ 412 นาโนเมตร โดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การดูดกลืนแสง 14,150 M −1 cm −1สำหรับสารละลายบัฟเฟอร์เจือจาง[ 4 ] [ 5 ]และค่าสัมประสิทธิ์ 13,700 M −1 cm −1สำหรับความเข้มข้นของเกลือสูง เช่นกัวนิดิเนียมไฮโดรคลอไรด์ 6 M หรือยูเรีย 8 M [ 5 ]สิ่งพิมพ์ดั้งเดิมของ Ellman ในปี 1959 ประมาณค่าการดูดกลืนแสงโมลาร์ไว้ที่ 13,600 M −1 cm −1และค่านี้สามารถพบได้ในการใช้งานสมัยใหม่บางอย่างของวิธีนี้ แม้ว่าจะมีการปรับปรุงการกำหนดแล้วก็ตาม[ 6 ] DTNB เชิงพาณิชย์อาจไม่บริสุทธิ์อย่างสมบูรณ์ ดังนั้นอาจต้องทำการตกผลึกใหม่เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่แม่นยำและทำซ้ำได้[ 5 ]
รีเอเจนต์ของ Ellman สามารถใช้ในการวัดไทออลที่มีมวลโมเลกุลต่ำ เช่นกลูตาไธโอนทั้งในสารละลายบริสุทธิ์และตัวอย่างทางชีวภาพ เช่น เลือด[ 7 ]นอกจากนี้ยังสามารถวัดจำนวนกลุ่มไทออลบนโปรตีนได้อีกด้วย[ 7 ]
ลิงก์ภายนอก
- การหาปริมาณซัลฟ์ไฮดริลด้วย DTNB และรีเอเจนต์ของเอลแมน (ใช้ค่าสัมประสิทธิ์การดูดกลืนแสงที่ไม่ถูกต้อง)