ในสาขาเนื้อเยื่อวิทยาพยาธิวิทยาและชีววิทยาของเซลล์การตรึงเนื้อเยื่อคือการรักษาเนื้อเยื่อทางชีวภาพจากการเน่าเปื่อยเนื่องจากการสลายตัวเองหรือการเน่าเสีย การตรึงเนื้อเยื่อจะยุติปฏิกิริยาทางชีวเคมีที่กำลังเกิดขึ้น และอาจเพิ่มความแข็งแรงหรือความคงตัวทางกลของเนื้อเยื่อที่ได้รับการบำบัดได้ การตรึงเนื้อเยื่อเป็นขั้นตอนที่สำคัญในการเตรียมชิ้นเนื้อสำหรับการศึกษาเนื้อเยื่อ โดยมีวัตถุประสงค์หลักคือการรักษาเซลล์และส่วนประกอบของเนื้อเยื่อ และทำในลักษณะที่ช่วยให้สามารถเตรียมชิ้นเนื้อบางๆ ที่ย้อมสีได้ ซึ่งจะช่วยให้สามารถตรวจสอบโครงสร้างของเนื้อเยื่อได้ โดยโครงสร้างของเนื้อเยื่อจะถูกกำหนดโดยรูปร่างและขนาดของโมเลกุลขนาดใหญ่ (ในและรอบๆ เซลล์) เช่นโปรตีนและกรดนิวคลีอิก

ในการทำหน้าที่ปกป้อง สารตรึงจะทำให้โปรตีนเสียสภาพโดยการจับตัวเป็นก้อน โดยการสร้างสารประกอบเพิ่มเติม หรือโดยการรวมกันของกระบวนการจับตัวเป็นก้อนและกระบวนการเพิ่มเติม สารประกอบที่เพิ่มทางเคมีให้กับโมเลกุลขนาดใหญ่จะทำให้โครงสร้างคงตัวได้อย่างมีประสิทธิภาพมากที่สุดหากสามารถรวมเข้ากับส่วนต่างๆ ของโมเลกุลขนาดใหญ่สองชนิดที่แตกต่างกัน ซึ่งเป็นผลที่เรียกว่าการเชื่อมโยงข้าม การตรึงเนื้อเยื่อทำขึ้นด้วยเหตุผลหลายประการ เหตุผลหนึ่งคือเพื่อฆ่าเนื้อเยื่อเพื่อป้องกันการเน่าเปื่อยหลังการตาย (การสลายตัวเองและการเน่าเปื่อย) ^{[ 1 ]} การตรึงช่วยรักษาสารชีวภาพ ( เนื้อเยื่อหรือเซลล์ ) ให้ใกล้เคียงกับสภาพธรรมชาติมากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ในกระบวนการเตรียมเนื้อเยื่อสำหรับการตรวจสอบ เพื่อให้บรรลุเป้าหมายนี้ มักจะต้องเป็นไปตามเงื่อนไขหลายประการ

ประการแรก สารตรึงสภาพมักจะทำหน้าที่ยับยั้งโมเลกุลชีวภาพดั้งเดิม โดยเฉพาะเอนไซม์ย่อยโปรตีน ซึ่งหากไม่ยับยั้งจะทำให้ตัวอย่างถูกย่อยสลายหรือเสียหาย

ประการที่สอง สารตรึงสภาพโดยทั่วไปจะช่วยปกป้องตัวอย่างจากความเสียหายภายนอก สารตรึงสภาพเป็นพิษต่อจุลินทรีย์ทั่วไปส่วนใหญ่ ( โดยเฉพาะ แบคทีเรีย ) ที่อาจมีอยู่ในตัวอย่างเนื้อเยื่อหรืออาจเข้ามายึดครองเนื้อเยื่อที่ถูกตรึงสภาพ นอกจากนี้ สารตรึงสภาพหลายชนิดยังเปลี่ยนแปลงโครงสร้างทางเคมีของวัสดุที่ถูกตรึงสภาพ ทำให้จุลินทรีย์ฉวยโอกาสไม่สามารถย่อยได้ (ทั้งย่อยไม่ได้หรือเป็นพิษ)

สุดท้ายนี้ สารตรึงสภาพมักจะเปลี่ยนแปลงเซลล์หรือเนื้อเยื่อในระดับโมเลกุลเพื่อเพิ่มความแข็งแรงหรือความเสถียรเชิงกล ความแข็งแรงและความแข็งแงที่เพิ่มขึ้นนี้สามารถช่วยรักษารูปทรงและโครงสร้าง (สัณฐานวิทยา) ของตัวอย่างในระหว่างกระบวนการวิเคราะห์ต่อไปได้

แม้แต่การตรึงที่ระมัดระวังที่สุดก็ยังทำให้ตัวอย่างเปลี่ยนแปลงและก่อให้เกิดสิ่งแปลกปลอมที่อาจรบกวนการตีความโครงสร้างระดับเซลล์ ตัวอย่างที่โดดเด่นคือเมโซโซม ของแบคทีเรีย ซึ่งเคยคิดว่าเป็นออร์แกเนลล์ในแบคทีเรียแกรมบวกในช่วงทศวรรษ 1970 แต่ต่อมาได้รับการพิสูจน์โดยเทคนิคใหม่ที่พัฒนาขึ้นสำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนว่าเป็นเพียงสิ่งแปลกปลอมที่เกิดจากการตรึงทางเคมี^{[ 2 ] [ 3 ]}การกำหนดมาตรฐานของการตรึงและขั้นตอนการประมวลผลเนื้อเยื่ออื่นๆ จะคำนึงถึงการเกิดสิ่งแปลกปลอมนี้ โดยการกำหนดว่าขั้นตอนใดก่อให้เกิดสิ่งแปลกปลอมประเภทใด นักวิจัยที่รู้ว่าควรคาดหวังสิ่งแปลกปลอมประเภทใดกับเนื้อเยื่อแต่ละประเภทและเทคนิคการประมวลผลแต่ละแบบ สามารถตีความส่วนที่มีสิ่งแปลกปลอมได้อย่างแม่นยำ หรือเลือกเทคนิคที่ลดสิ่งแปลกปลอมในบริเวณที่สนใจให้น้อยที่สุด

การตรึงเนื้อเยื่อมักเป็นขั้นตอนแรกในกระบวนการหลายขั้นตอนเพื่อเตรียมตัวอย่างวัสดุชีวภาพสำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์หรือการวิเคราะห์อื่นๆ ดังนั้น การเลือกสารตรึงเนื้อเยื่อและวิธีการตรึงเนื้อเยื่ออาจขึ้นอยู่กับขั้นตอนการประมวลผลเพิ่มเติมและการวิเคราะห์ขั้นสุดท้ายที่วางแผนไว้ ตัวอย่างเช่น การตรวจทางอิมมูโนฮิสโตเคมีใช้แอนติบอดีที่จับกับโปรตีนเป้าหมายเฉพาะ การตรึงเนื้อเยื่อเป็นเวลานานอาจปิดกั้นเป้าหมายเหล่านี้ทางเคมีและป้องกันการจับของแอนติบอดี ในกรณีเหล่านี้ โดยทั่วไปจะใช้วิธี "ตรึงอย่างรวดเร็ว" โดยใช้ฟอร์มาลิน เย็น ประมาณ 24 ชั่วโมง เมทานอล (100%) ก็สามารถใช้สำหรับการตรึงอย่างรวดเร็วได้เช่นกัน และระยะเวลาอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับวัสดุชีวภาพ ตัวอย่างเช่น เซลล์มะเร็งเต้านมมนุษย์ MDA-MB 231สามารถตรึงได้เพียง 3 นาทีด้วยเมทานอลเย็น (-20 °C) สำหรับการศึกษาการระบุตำแหน่งของเอนไซม์ เนื้อเยื่อควรได้รับการตรึงเบื้องต้นอย่างเบาๆ เท่านั้น หรือตรึงภายหลังหลังจากที่ผลิตภัณฑ์จากกิจกรรมของเอนไซม์เกิดขึ้นแล้ว

โดยทั่วไปแล้ว กระบวนการตรึงเนื้อเยื่อมีอยู่ 3 ประเภท ขึ้นอยู่กับตัวอย่างที่ต้องการตรึง

การตรึงด้วยความร้อนใช้สำหรับการตรึงสิ่งมีชีวิตเซลล์เดียว ซึ่งส่วนใหญ่เป็นแบคทีเรียและอาร์เคีย โดยทั่วไป สิ่งมีชีวิตจะถูกผสมกับน้ำหรือน้ำเกลือทางสรีรวิทยาเพื่อช่วยกระจายตัวอย่างให้ทั่วถึง เมื่อเจือจางแล้ว ตัวอย่างจะถูกกระจายลงบนสไลด์กล้องจุลทรรศน์ตัวอย่างแบคทีเรียที่เจือจางนี้มักเรียกว่าสเมียร์หลังจากวางลงบนสไลด์แล้ว หลังจากที่สเมียร์แห้งที่อุณหภูมิห้อง สไลด์จะถูกจับด้วยคีมหรือที่หนีบผ้าและผ่านเปลวไฟของตะเกียงบุนเซนหลายครั้งเพื่อฆ่าด้วยความร้อนและทำให้สิ่งมีชีวิตยึดติดกับสไลด์ อุปกรณ์เผาไหม้ขนาดเล็กก็สามารถใช้ได้เช่นกัน หลังจากให้ความร้อนแล้ว ตัวอย่างมักจะถูกย้อมสีแล้วถ่ายภาพโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ [ 4 ] การตรึงด้วยความร้อนโดยทั่วไปจะรักษารูปร่างโดยรวมไว้ แต่ไม่รักษาโครงสร้างภายใน ความร้อนจะทำให้เอนไซม์โปรตีโอไลติกเสียสภาพและป้องกัน^{การสลายตัว}การตรึงด้วยความร้อนไม่สามารถใช้ในวิธีการย้อมแคปซูลได้ เนื่องจากความร้อนจะทำให้แคปซูล ( ไกลโคคาลิกซ์ ) หดตัวหรือถูกทำลายและไม่สามารถมองเห็นได้ในการย้อมสี^{[ 5 ]}

การแช่สามารถใช้ในการตรึงตัวอย่างเนื้อเยื่อตั้งแต่เซลล์เดียวไปจนถึงสิ่งมีชีวิตทั้งตัว ตัวอย่างเนื้อเยื่อจะถูกแช่ในสารละลายตรึงเป็นระยะเวลาที่กำหนด สารละลายตรึงต้องมีปริมาตรอย่างน้อย 10 เท่าของปริมาตรของเนื้อเยื่อ^{[ 6 ]}เพื่อให้การตรึงประสบความสำเร็จ สารละลายตรึงต้องแพร่กระจายไปทั่วทั้งเนื้อเยื่อ ดังนั้นขนาดและความหนาแน่นของเนื้อเยื่อ รวมถึงชนิดของสารละลายตรึงจึงต้องนำมาพิจารณาด้วย นี่เป็นเทคนิคทั่วไปสำหรับการใช้งานกับเซลล์ แต่สามารถใช้กับเนื้อเยื่อขนาดใหญ่ได้เช่นกัน การใช้ตัวอย่างขนาดใหญ่ขึ้นหมายความว่าต้องแช่นานขึ้นเพื่อให้สารละลายตรึงเข้าถึงเนื้อเยื่อส่วนลึก^{[ 7 ]}

การไหลเวียนของของเหลวผ่านหลอดเลือดหรือช่องทางธรรมชาติของอวัยวะหรือสิ่งมีชีวิตเรียกว่าการตรึงเนื้อเยื่อ ในการตรึงเนื้อเยื่อโดยการไหลเวียนของของเหลว สารตรึงจะถูกสูบฉีดเข้าไปในระบบไหลเวียนโลหิต โดยปกติจะทำผ่านเข็มที่สอดเข้าไปในโพรงหัวใจ ด้านซ้าย ซึ่งสามารถทำได้โดยใช้การนำทางด้วยอัลตราซาวนด์ หรือโดยการเปิดช่องอกของผู้ป่วย^{[ 8 ]}สารตรึงจะถูกฉีดเข้าไปในหัวใจโดยปริมาตรการฉีดจะตรงกับปริมาณเลือดที่หัวใจสูบฉีดตามปกติ การใช้ระบบไหลเวียนโลหิตตามธรรมชาติ สารตรึงจะกระจายไปทั่วร่างกาย และเนื้อเยื่อจะไม่ตายจนกว่าจะได้รับการตรึง เมื่อใช้วิธีนี้ จะต้องเพิ่มพอร์ตระบายในระบบไหลเวียนโลหิตเพื่อรองรับปริมาตรของสารตรึงและบัฟเฟอร์ที่เพิ่มขึ้น ซึ่งโดยทั่วไปจะทำในห้องหัวใจด้านขวาสารตรึงจะถูกสูบฉีดเข้าไปในระบบไหลเวียนโลหิตจนกว่าจะแทนที่เลือดทั้งหมด การใช้การฉีดสารละลายมีข้อดีคือช่วยรักษารูปร่าง^{[ 9 ]}แต่ข้อเสียคือสิ่งมีชีวิตจะตาย และปริมาณสารตรึงสภาพที่จำเป็นสำหรับสิ่งมีชีวิตขนาดใหญ่จะมีปริมาณมาก ซึ่งอาจทำให้ต้นทุนสูงขึ้น สามารถลดปริมาณของเหลวที่จำเป็นในการทำการตรึงสภาพด้วยการฉีดสารละลายได้โดยการบีบหลอดเลือดแดงที่เลี้ยงเนื้อเยื่อที่ไม่เกี่ยวข้องกับการวิจัย การตรึงสภาพด้วยการฉีดสารละลายมักใช้ในการถ่ายภาพเนื้อเยื่อสมอง ปอด และไตในสัตว์ฟันแทะ และยังใช้ในการชันสูตรศพในมนุษย์ด้วย^{[ 7 ] [ 10 ]}

ทั้งในกระบวนการตรึงด้วยการแช่และการตรึงด้วยสารละลายเคมี จะมีการใช้สารตรึงทางเคมีเพื่อรักษาสภาพของโครงสร้างให้ใกล้เคียงกับเนื้อเยื่อที่มีชีวิตมากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ (ทั้งทางเคมีและโครงสร้าง) ซึ่งจำเป็นต้องใช้สารตรึงทางเคมี

สารตรึงแบบเชื่อมโยงจะทำหน้าที่โดยการสร้างพันธะเคมีแบบโควาเลนต์ระหว่างโปรตีนในเนื้อเยื่อ ซึ่งจะยึดโปรตีนที่ละลายได้เข้ากับโครงร่างเซลล์และทำให้เนื้อเยื่อมีความแข็งแรงมากขึ้น การรักษาสภาพโครงสร้างโครงร่างเซลล์ชั่วคราวหรือละเอียด เช่น การหดตัวระหว่างคลื่นการแบ่งตัวของตัวอ่อนจะทำได้อย่างดีที่สุดโดยการเตรียมการล่วงหน้าโดยใช้ไมโครเวฟก่อนการเติมสารตรึงแบบเชื่อมโยง^{[ 11 ] [ 12 ]}

สารตรึงเนื้อเยื่อที่ใช้กันมากที่สุดในทางจุลพยาธิวิทยาคือฟอร์มาลดีไฮด์โดยปกติจะใช้ในรูปของฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ที่เป็นกลาง 10% (NBF) ซึ่งก็คือฟอร์มาลดีไฮด์ประมาณ 3.7%–4.0% ในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต pH 7 เนื่องจากฟอร์มาลดีไฮด์เป็นก๊าซที่อุณหภูมิห้อง จึงใช้ฟอร์มาลิน – ก๊าซฟอร์มาลดีไฮด์ละลายในน้ำ (~37% w/v) – ในการเตรียมสารตรึงเนื้อเยื่อชนิดแรก ฟอร์มาลดีไฮด์ตรึงเนื้อเยื่อโดยการเชื่อมโยงโปรตีน โดยเฉพาะอย่างยิ่งส่วนที่เหลือของกรดอะมิโนพื้นฐานไลซีนผลของมันสามารถย้อนกลับได้ด้วยน้ำปริมาณมาก และหลีกเลี่ยงการเกิดสีจากฟอร์มาลิน พาราฟอร์มาลดีไฮด์ก็ใช้กันทั่วไปเช่นกัน และจะสลายตัวกลับเป็นฟอร์มาลินเมื่อได้รับความร้อน ทำให้เป็นสารตรึงเนื้อเยื่อที่มีประสิทธิภาพเช่นกัน ข้อดีอื่นๆ ของพาราฟอร์มาลดีไฮด์ ได้แก่ การเก็บรักษาได้นานและการแทรกซึมเข้าสู่เนื้อเยื่อได้ดี เหมาะอย่างยิ่งสำหรับเทคนิคอิมมูโนฮิสโตเคมี ไอระเหยของฟอร์มาลดีไฮด์ยังสามารถใช้เป็นสารตรึงเนื้อเยื่อสำหรับสเมียร์เซลล์ได้อีกด้วย

อัลดี ไฮด์อีกชนิดหนึ่งที่นิยมใช้ในการตรึงเนื้อเยื่อคือกลูตารัลดีไฮด์มันทำงานคล้ายกับฟอร์มาลดีไฮด์ โดยทำให้โครงสร้างอัลฟาเฮลิกซ์ของโปรตีนเสียรูป อย่างไรก็ตาม กลูตารัลดีไฮด์เป็นโมเลกุลที่ใหญ่กว่าฟอร์มาลดีไฮด์ จึงซึมผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ได้ช้ากว่า ดังนั้น การตรึงเนื้อเยื่อด้วยกลูตารัลดีไฮด์ในตัวอย่างเนื้อเยื่อที่หนาจึงอาจทำได้ยาก ซึ่งสามารถแก้ไขได้โดยการลดขนาดของตัวอย่างเนื้อเยื่อ ข้อดีอย่างหนึ่งของการตรึงด้วยกลูตารัลดีไฮด์คือ อาจให้ผลิตภัณฑ์ที่ตรึงแล้วมีความแข็งแรงหรือเชื่อมต่อกันแน่นกว่า ความยาวที่มากกว่าและหมู่แอลดีไฮด์สองหมู่ทำให้มันสามารถ "เชื่อม" และเชื่อมต่อโมเลกุลโปรตีนที่อยู่ห่างกันได้มากขึ้น มันทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงที่รวดเร็วและไม่สามารถย้อนกลับได้ เหมาะสำหรับการใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ทำงานได้ดีที่อุณหภูมิ 4 °C และให้รายละเอียดของไซโตพลาสซึมและนิวเคลียสโดยรวมที่ดีที่สุด อย่างไรก็ตาม มันไม่เหมาะสำหรับการย้อมสีทางอิมมูโนฮิสโตเคมี

ขั้นตอนการตรึงเนื้อเยื่อบางวิธีระบุให้ใช้ฟอร์มาลดีไฮด์และกลูตารัลดีไฮด์ผสมกัน เพื่อให้ความเข้มข้นของสารทั้งสองชนิดเสริมกัน

สารตรึงโครงสร้างแบบเชื่อมโยงข้ามเหล่านี้ โดยเฉพาะฟอร์มาลดีไฮด์ มีแนวโน้มที่จะรักษาสภาพโครงสร้างทุติยภูมิของโปรตีนและอาจรักษาสภาพโครงสร้างตติยภูมิ ส่วนใหญ่ไว้ ได้ ด้วย

สารตรึงสภาพที่ ทำให้เกิดการตกตะกอน (หรือการทำให้เสียสภาพ ) ทำงานโดยการลดความสามารถในการละลายของโมเลกุลโปรตีน และมักจะทำลาย ปฏิกิริยา ไฮโดรโฟบิกที่ทำให้โปรตีนหลายชนิดมีโครงสร้างระดับตติยภูมิการตกตะกอนและการรวมกลุ่มของโปรตีนเป็นกระบวนการที่แตกต่างอย่างมากจากการเชื่อมโยงข้ามที่เกิดขึ้นกับสารตรึงสภาพประเภทอัลดีไฮด์

สารตรึงสภาพที่ทำให้เกิดการตกตะกอนที่พบได้บ่อยที่สุดคือเอทานอลและเมทานอลโดยทั่วไปใช้ในการตรึงสภาพชิ้นเนื้อแช่แข็งและสเมียร์อะซิโตนก็มีการใช้เช่นกัน และพบว่าให้ผลในการรักษาสภาพทางเนื้อเยื่อวิทยาที่ดีกว่าชิ้นเนื้อแช่แข็งเมื่อใช้ในเทคนิคอะซิโตนเมทิลเบนโซเอตไซลีน (AMEX)

เมทานอล เอทานอล และอะซิโตน ซึ่งทำให้โปรตีนเสียสภาพ มักไม่ค่อยถูกนำมาใช้เพียงอย่างเดียวในการตรึงชิ้นเนื้อ เว้นแต่จะใช้ในการศึกษาเกี่ยวกับกรดนิวคลีอิก

กรดอะซิติกเป็นสารที่ทำให้เสียสภาพซึ่งบางครั้งใช้ร่วมกับสารตรึงแบบตกตะกอนอื่นๆ เช่น Davidson's AFA ^{[ 13 ]}แอลกอฮอล์เพียงอย่างเดียวเป็นที่ทราบกันดีว่าทำให้เนื้อเยื่อหดตัวและแข็งตัวอย่างมากในระหว่างการตรึง ในขณะที่กรดอะซิติกเพียงอย่างเดียวเกี่ยวข้องกับการบวมของเนื้อเยื่อ การรวมทั้งสองเข้าด้วยกันอาจส่งผลให้การรักษารูปร่าง ของเนื้อเยื่อ ดี ขึ้น

สารตรึงสภาพแบบออกซิไดซ์สามารถทำปฏิกิริยากับหมู่ข้างเคียงของโปรตีนและโมเลกุลชีวภาพอื่นๆ ทำให้เกิดพันธะเชื่อมโยงที่ช่วยให้โครงสร้างของเนื้อเยื่อคงตัว อย่างไรก็ตาม สารเหล่านี้ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างอย่างมาก แม้ว่าจะยังคงรักษาโครงสร้างเซลล์ที่ดีไว้ได้ และส่วนใหญ่ใช้เป็นสารตรึงสภาพรอง

ออสเมียมเตตระออกไซด์มักใช้เป็นสารตรึงสภาพรองเมื่อเตรียมตัวอย่างสำหรับการศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (ไม่ใช้สำหรับการศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง เนื่องจากแทรกซึมผ่านเนื้อเยื่อหนาได้ไม่ดี)

โพแทสเซียมไดโครเมตกรดโครมิกและโพแทสเซียมเปอร์แมงกาเนตล้วนถูกนำมาใช้ในการเตรียมชิ้นเนื้อทางจุลวิทยาเฉพาะบางประเภท

สารกลุ่มปรอท เช่น B-5 และสารตรึงเนื้อเยื่อของ Zenkerมีกลไกที่ไม่ทราบแน่ชัดที่ช่วยเพิ่มความสว่างของการย้อมสีและให้รายละเอียดของนิวเคลียสที่ดีเยี่ยม แม้ว่าจะออกฤทธิ์เร็ว แต่สารกลุ่มปรอทแทรกซึมได้ไม่ดีและทำให้เนื้อเยื่อหดตัว การใช้งานที่ดีที่สุดคือการตรึงเนื้อเยื่อเม็ดเลือดและเนื้อเยื่อเรติคิวโลเอนโดเธล นอกจากนี้ โปรดทราบว่าเนื่องจากสารเหล่านี้มีปรอท จึงต้องระมัดระวังในการกำจัดทิ้ง

สารพิเครตสามารถแทรกซึมเข้าสู่เนื้อเยื่อได้ดี ทำปฏิกิริยากับฮิสโตนและโปรตีนพื้นฐานเพื่อสร้างผลึกพิเครตกับกรดอะมิโนและตกตะกอนโปรตีนทั้งหมด เป็นสารตรึงที่ดีสำหรับเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน รักษาไกลโคเจนได้ดี และสกัดไขมันเพื่อให้ผลลัพธ์ที่เหนือกว่าฟอร์มาลดีไฮด์ในการย้อมภูมิคุ้มกันของฮอร์โมนชีวภาพและโพลีเปปไทด์ อย่างไรก็ตาม สารพิเครตทำให้สูญเสียเบโซฟิลเว้นแต่จะล้างตัวอย่างให้สะอาดหมดจดหลังจากการตรึง

เทคนิค HOPE (Hepes-glutamic acid buffer-mediated organic solvent protection effect) ช่วยให้ได้โครงสร้างคล้ายฟอร์มาลิน รักษาโปรตีนแอนติเจนสำหรับการตรวจทางอิมมูโนฮิสโตเคมีและเอนไซม์ฮิสโตเคมีได้อย่างดีเยี่ยม ให้ผลผลิต RNA และ DNA ที่ดี และปราศจากโปรตีนที่เกิดการเชื่อมโยงกัน

• สารตรึงคาร์นอฟสกี

• การตรึงตัวอย่างเพื่อทำสไลด์ถาวร
• กลยุทธ์และสูตรการตรึงสำหรับการย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี