พีเอ็มเอสเอฟ
ในทางชีวเคมีฟีนิลเมทิลซัลโฟนิลฟลูออไรด์ ( PMSF ) เป็น สารยับยั้ง เซรินโปรตีเอส (สารยับยั้งเซรินไฮโดรเลส) ที่ใช้กันทั่วไปในการเตรียมไลเซตของเซลล์ PMSF ไม่ได้ยับยั้งเซรินโปรตีเอสทั้งหมด[ 1 ] ความเข้มข้นที่มีประสิทธิภาพของ PMSF อยู่ระหว่าง 0.1 - 1 mM ครึ่งชีวิตสั้นในสารละลายในน้ำ (110 นาทีที่ pH 7, 55 นาทีที่ pH 7.5 และ 35 นาทีที่ pH 8 ที่อุณหภูมิ 25 °C) [ 2 ]ที่อุณหภูมิ 4˚C, pH 8, PMSF จะถูกย่อยสลายเกือบหมดหลังจาก 1 วัน[ 2 ]สารละลายสต็อกมักจะเตรียมในเอทานอล ปราศจากน้ำ ไอโซโพรพานอลหรือน้ำมันข้าวโพดและเจือจางทันทีก่อนใช้งาน
PMSF ทำปฏิกิริยาจำเพาะกับหมู่เซรินในตำแหน่งเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์เซรินไฮโดรเลส มันไม่จับกับหมู่เซรินอื่นๆ ในโปรตีน นี่เป็นผลมาจากการทำงานที่มากเกินไปของหมู่เซรินนั้น ซึ่งเกิดจากสภาวะแวดล้อมเฉพาะในตำแหน่งเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์ ( ไตรแอดเร่งปฏิกิริยา ) เนื่องจาก PMSF จับกับเอนไซม์ด้วยพันธะโควาเลนต์ จึงสามารถมองเห็นโครงสร้างของสารประกอบเชิงซ้อนได้ด้วยการวิเคราะห์โครงสร้างด้วยรังสีเอกซ์ ดังนั้นจึงสามารถใช้เป็นตัวบ่งชี้ทางเคมีเพื่อระบุหมู่เซรินที่สำคัญในตำแหน่งเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์ได้
- เอนไซม์(แอคทีฟ)Ser-OH + F-SO CH C H → เอนไซม์Ser-O-SO CH C H + HF
- เซรินโปรตีเอส + PMSF → สารประกอบเอนไซม์-PMS ที่ไม่สามารถย้อนกลับได้ + HF
ปริมาณยาที่ทำให้เสียชีวิตครึ่งหนึ่งอยู่ระหว่าง 150–215 มก./กก. [ 3 ] [ 4 ] ( สารยับยั้ง อะเซทิลโคลีนเอสเตอเรส) ควรจัดการ PMSF ภายในตู้ดูดควันและสวมถุงมือเท่านั้น บางครั้งแนะนำให้ใช้ DMSOเป็นตัวทำละลายสำหรับสารละลายเข้มข้น แต่ไม่ควรใช้เนื่องจากทำให้ผิวหนังที่สมบูรณ์สามารถซึมผ่าน PMSF ได้
ความเสถียร
ความเสถียรของ PMSF ในสารละลายน้ำนั้นต่ำ เนื่องจากเกิดปฏิกิริยาไฮโดรไลซิสกับน้ำ มีรายงานว่า PMSF มีความเสถียรประมาณ 6 เดือนที่อุณหภูมิ -20˚C ในDMSO [ 5 ] และ9เดือนที่อุณหภูมิห้องในไอโซโพรพาน อ ล 100% [ 2 ] [ 6 ]
เอนไซม์เซรินที่ไม่ไวต่อสิ่งเร้า
โครงสร้างของโปรตีนบางชนิดจำกัดการเข้าถึงของ PMSF ที่ค่อนข้างใหญ่ ดังนั้น PMSF จึงไม่มีฤทธิ์ต่อเอนไซม์เซรินเหล่านี้ เช่นพาลมิโทอิล-โปรตีนไทโอเอสเทอเรส[ 7 ]สารรีเอเจนต์ซัลโฟนิลฟลูออไรด์ทางเลือก เช่นp-APMSFและHDSFสามารถเข้าถึงโครงสร้างโปรตีนที่พับตัวตามธรรมชาติได้ และอาจทำปฏิกิริยากับเอนไซม์เซรินที่ PMSF ไม่สามารถทำปฏิกิริยาได้อย่างมีประสิทธิภาพ ความสามารถในการเลือกที่เปลี่ยนแปลงไประหว่างสารรีเอเจนต์ซัลโฟนิลฟลูออไรด์นี้ถูกนำมาใช้ในการจำแนกและแยกเอนไซม์เซรินประเภทเฉพาะ[ 7 ]
ดูเพิ่มเติม
- เออีบีเอสเอฟ
- DFP (ไดไอโซโพรพิลฟลูออโรฟอสเฟต) เป็นรีเอเจนต์ฟอสโฟรีเลตฟลูออโรฟอสโฟเนตที่คล้ายคลึงกัน
ลิงก์ภายนอก
- ฐาน ข้อมูลออนไลน์ MEROPSสำหรับเอนไซม์เปปติเดสและสารยับยั้ง : PMSF