การทดสอบความเข้ากันได้ของเลือด

การทดสอบความเข้ากันได้ของเลือด
การทดสอบความเข้ากันได้ของเลือด
	หมู่เลือด O บวก ตรวจสอบโดยวิธีหลอดทดลอง จากซ้ายไปขวา: เซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยไม่จับตัวกับรีเอเจนต์แอนตี้-เอ และแอนตี้-บี แต่จับตัวกับรีเอเจนต์แอนตี้-ดี พลาสมาของผู้ป่วยจับตัวกับเซลล์เม็ดเลือดแดงชนิด A1 และ B
วัตถุประสงค์	การระบุความไม่เข้ากันระหว่างหมู่เลือด
การทดสอบ ของ	เซลล์เม็ดเลือดแดง ; พลาสมาในเลือด
เมดไลน์พลัส	003345
อีเมดิซีน	1731198
โลอิงค์	34532-2 , 883–9 , 10331-7

การตรวจความเข้ากันได้ของเลือดดำเนินการในห้องปฏิบัติการทางการแพทย์เพื่อระบุความไม่เข้ากันที่อาจเกิดขึ้นระหว่างระบบหมู่เลือดในการถ่ายเลือดนอกจากนี้ยังใช้ในการวินิจฉัยและป้องกันภาวะแทรกซ้อนบางอย่างของการตั้งครรภ์ที่อาจเกิดขึ้นเมื่อทารกมีหมู่เลือดต่างจากมารดา การตรวจความเข้ากันได้ของเลือดประกอบด้วยการตรวจหมู่เลือดซึ่งตรวจหาแอนติเจนบนเม็ดเลือดแดงที่กำหนดหมู่เลือดของบุคคล การตรวจหาแอนติบอดี ที่ไม่คาดคิด ต่อแอนติเจนหมู่เลือด ( การคัดกรองและการระบุแอนติบอดี ) และในกรณีของการถ่ายเลือด การผสมพลาสมา ของผู้รับ กับเม็ดเลือดแดงของผู้บริจาคเพื่อตรวจหาความไม่เข้ากัน ( การจับคู่ข้าม ) การตรวจหมู่เลือดตามปกติเกี่ยวข้องกับการกำหนด หมู่เลือด ABOและRhD (ปัจจัย Rh) ^{[หมายเหตุ 1 ]}และเกี่ยวข้องกับการระบุแอนติเจน ABO บนเม็ดเลือดแดง (การจัดหมู่แบบไปข้างหน้า) และการระบุแอนติบอดี ABO ในพลาสมา (การจัดหมู่แบบย้อนกลับ) อาจมีการทดสอบ แอนติเจนหมู่เลือดอื่น ๆในสถานการณ์ทางคลินิกเฉพาะ

การทดสอบความเข้ากันได้ของเลือดใช้ปฏิกิริยาระหว่างแอนติเจนหมู่เลือดและแอนติบอดีโดยเฉพาะอย่างยิ่งความสามารถของแอนติบอดีในการทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงจับตัวกันเป็นก้อนเมื่อจับกับแอนติเจนบนพื้นผิวเซลล์ ซึ่งเป็นปรากฏการณ์ที่เรียกว่าการจับกลุ่ม (agglutination ) เทคนิคที่อาศัยปฏิกิริยาแอนติเจน-แอนติบอดีเรียกว่า วิธีการ ทางซีรั่มวิทยาและมีวิธีการดังกล่าวหลายวิธี ตั้งแต่การทดสอบด้วยมือโดยใช้หลอดทดลองหรือสไลด์ ไปจนถึงระบบอัตโนมัติเต็มรูปแบบ นอกจากนี้ยังสามารถกำหนดหมู่เลือดได้โดยการทดสอบทางพันธุกรรมซึ่งใช้ในกรณีที่มีสภาวะที่รบกวนการทดสอบทางซีรั่มวิทยา หรือเมื่อต้องการความแม่นยำสูงในการระบุแอนติเจน

มีหลายสภาวะที่อาจทำให้ผลการตรวจความเข้ากันได้ของเลือดผิดพลาดหรือไม่แน่ชัด เมื่อปัญหาเหล่านี้ส่งผลต่อการตรวจหมู่เลือด ABO จะเรียกว่าความคลาดเคลื่อนของหมู่เลือด ABOความคลาดเคลื่อนของหมู่เลือด ABO ต้องได้รับการตรวจสอบและแก้ไขก่อนที่จะรายงานหมู่เลือดของบุคคลนั้น แหล่งที่มาของข้อผิดพลาดอื่นๆ ได้แก่ ปรากฏการณ์ " RhD อ่อน " ซึ่งผู้ที่มีแอนติเจน RhD เป็นบวกจะแสดงปฏิกิริยาอ่อนหรือเป็นลบเมื่อทดสอบ RhD และการมีแอนติบอดีอิมมูโนโกลบูลิน Gบนเซลล์เม็ดเลือดแดง ซึ่งอาจรบกวนการคัดกรองแอนติบอดี การจับคู่ และการจำแนกหมู่เลือดสำหรับแอนติเจนหมู่เลือดบางชนิด

การใช้ทางการแพทย์

การทดสอบความเข้ากันได้ของเลือดจะดำเนินการเป็นประจำก่อนการถ่ายเลือดกระบวนการทดสอบความเข้ากันได้แบบเต็มรูปแบบประกอบด้วย การตรวจหาหมู่เลือด ABOและRhD (ปัจจัย Rh) การตรวจคัดกรองแอนติบอดีต่อระบบหมู่เลือดอื่นๆและการจับคู่ข้าม ซึ่งเกี่ยวข้องกับการทดสอบ พลาสมาเลือดของผู้รับกับเซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้บริจาคเพื่อตรวจสอบความไม่เข้ากันขั้นสุดท้าย หากตรวจพบแอนติบอดีหมู่เลือดที่ไม่คาดคิด จำเป็นต้องมีการทดสอบเพิ่มเติมเพื่อระบุแอนติบอดี^{[ 3 ]}^{: 740}และตรวจสอบให้แน่ใจว่าเลือดของผู้บริจาคเป็นลบสำหรับแอนติเจนที่เกี่ยวข้อง^{[ 1 ]}^{: 261}การจับคู่ข้ามทางซีรัมวิทยาอาจถูกละเว้นได้หากการตรวจคัดกรองแอนติบอดีของผู้รับเป็นลบ ไม่มีประวัติของแอนติบอดีที่มีนัยสำคัญทางคลินิก และหมู่เลือด ABO/Rh ของพวกเขาได้รับการยืนยันจากบันทึกประวัติหรือจากตัวอย่างเลือดที่สอง และในกรณีฉุกเฉิน อาจมีการถ่ายเลือดก่อนที่จะมีผลการทดสอบความเข้ากันได้ใดๆ^{[ 1 ]}^{: 262–3}

การทดสอบความเข้ากันได้ของเลือดมักจะดำเนินการกับหญิงตั้งครรภ์และเลือดจากสายสะดือของทารกแรกเกิด เนื่องจากความไม่เข้ากันของเลือดทำให้ทารกมีความเสี่ยงต่อการเกิดโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดง แตก ^{[ 4 ]}^{[ 5 ]}นอกจากนี้ยังใช้ก่อนการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดเนื่องจากความไม่เข้ากันของหมู่เลือดอาจเป็นสาเหตุของโรคการต่อต้านเนื้อเยื่อของผู้รับแบบ เฉียบพลันในบางกรณี ^{[ 6 ]}

หลักการ

หมู่เลือดถูกกำหนดตามการมีอยู่หรือไม่มีอยู่ของแอนติเจน เฉพาะ บนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดง แอนติเจนที่สำคัญที่สุดในทางการแพทย์คือ แอนติเจน ABOและRhD ^{[ 7 ]}^{: 585}แต่ยังมีระบบหมู่เลือดอื่นๆ อีกมากมาย และอาจมีความเกี่ยวข้องทางคลินิกในบางสถานการณ์ ณ ปี 2021 มีหมู่เลือดที่ได้รับการยอมรับอย่างเป็นทางการ 43 หมู่^{[ 8 ]}

ผู้ที่ขาดแอนติเจนหมู่เลือดบางชนิดบนเม็ดเลือดแดงของตนสามารถสร้างแอนติบอดีต่อแอนติเจนเหล่านี้ได้ ตัวอย่างเช่น ผู้ที่มีหมู่เลือด A จะสร้างแอนติบอดีต่อแอนติเจน B แอนติบอดีหมู่เลือด ABO เกิดขึ้นตามธรรมชาติ หมายความว่าพบได้ในผู้ที่ไม่เคยสัมผัสกับเลือดที่ไม่เข้ากัน^{[ 7 ]}^{: 585–92}แอนติบอดีต่อแอนติเจนหมู่เลือดอื่นๆ ส่วนใหญ่ รวมถึง RhD จะพัฒนาขึ้นหลังจากที่ผู้คนสัมผัสกับแอนติเจนผ่านการถ่ายเลือดหรือการตั้งครรภ์^{[ 1 ]}^{: 62}แอนติบอดีบางชนิดเหล่านี้สามารถจับกับเม็ดเลือดแดงที่ไม่เข้ากันและทำให้ถูกทำลายส่งผลให้เกิดปฏิกิริยาจากการถ่ายเลือดและภาวะแทรกซ้อนอื่นๆ^{[ 9 ]}^{: 210–11}

วิธีการ ทางซีรั่มวิทยาสำหรับการทดสอบความเข้ากันได้ของเลือดใช้ประโยชน์จากปฏิกิริยาแอนติบอดี-แอนติเจน เหล่านี้ ในการตรวจหมู่เลือด จะมีการเติมรี เอเจนต์ที่มีแอนติบอดีหมู่เลือด เรียกว่า แอ ^{นติเซรัม [} 7 ] ^:⁵⁸⁶^ลง^ในสารแขวนลอยของเซลล์เม็ดเลือด หากมีแอนติเจนที่เกี่ยวข้องอยู่ แอนติบอดีในรีเอเจนต์จะทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงจับตัวกัน (รวมตัวกันเป็นก้อน) ซึ่งสามารถระบุได้ด้วยสายตา^[¹^]^:⁶⁵ในการคัดกรองแอนติบอดี พลาสมาของบุคคลนั้นจะถูกทดสอบกับชุดของเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มีโปรไฟล์แอนติเจนที่ทราบ หากพลาสมาทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงตัวใดตัวหนึ่งในแผงจับตัวกัน แสดงว่าบุคคลนั้นมีแอนติบอดีต่อแอนติเจนตัวใดตัวหนึ่งที่มีอยู่บนเซลล์ ในการจับคู่ข้าม พลาสมาของผู้รับการถ่ายเลือดที่คาดหวังจะถูกเติมลงในเซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้บริจาคและสังเกตการจับตัวกัน (หรือการแตกตัวของเม็ดเลือดแดง) เพื่อตรวจหาแอนติบอดีที่อาจทำให้เกิดปฏิกิริยาจากการถ่ายเลือด^[³^]^:^722–5

แอนติบอดีหมู่เลือดมีสองรูปแบบหลัก ได้แก่อิมมูโนโกลบูลินเอ็ม (IgM) และอิมมูโนโกลบูลินจี (IgG) แอนติบอดีที่เป็น IgM เป็นหลัก เช่น แอนติบอดี ABO มักทำให้เม็ดเลือดแดงจับตัวกันทันทีที่อุณหภูมิห้อง ดังนั้น จึงสามารถกำหนดหมู่เลือด ABO ของบุคคลได้โดยการเติมเม็ดเลือดแดงลงในรีเอเจนต์แล้วปั่นเหวี่ยงหรือผสมตัวอย่าง^{[ 1 ]}^{: 122}และในการจับคู่ข้าม สามารถตรวจพบความไม่เข้ากันระหว่างหมู่เลือด ABO ได้ทันทีหลังจากการปั่นเหวี่ยง^{[ 3 ]}^{: 725}การตรวจหมู่เลือด RhD ก็มักใช้รีเอเจนต์ IgM เช่นกัน^{[ 10 ]}^{: 477}แม้ว่าแอนติ-RhD มักจะอยู่ในรูป IgG ในร่างกายก็ตาม^{[ 1 ]}^{: 161} แอนติบอดีที่ส่วนใหญ่เป็น IgG เช่น แอนติบอดีที่มุ่งเป้าไปที่แอนติเจนของระบบDuffyและKidd ^{[ 1 ]}^{: 198–200}โดยทั่วไปจะไม่ทำให้เกิดการจับกลุ่มทันที เนื่องจากขนาดเล็กของแอนติบอดี IgG ป้องกันการก่อตัวของโครงสร้างตาข่าย ดังนั้น การตรวจหมู่เลือดโดยใช้แอนติเซรัม IgG และการตรวจหาแอนติบอดี IgG จึงต้องใช้การทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อมเพื่อแสดงให้เห็นว่า IgG จับกับเซลล์เม็ดเลือดแดง^{[ 1 ]}^{: 104}

ในการทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อม ส่วนผสมของแอนติเซรัมหรือพลาสมาและเซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกบ่มที่ อุณหภูมิ 37 °C (99 °F)ซึ่งเป็นอุณหภูมิที่เหมาะสมที่สุดสำหรับปฏิกิริยาของแอนติบอดี IgG หลังจากบ่มแล้ว เซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกล้างด้วยน้ำเกลือเพื่อกำจัดแอนติบอดีที่ไม่จับ และจะเติมรีเอเจนต์แอนติฮิวแมนโกลบูลิน หากแอนติบอดี IgG จับกับแอนติเจนบนพื้นผิวเซลล์ แอนติฮิวแมนโกลบูลินจะจับกับแอนติบอดีเหล่านั้น ทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงจับกลุ่มกันหลังจากปั่นเหวี่ยง หากปฏิกิริยาเป็นลบ จะมีการเพิ่ม "เซลล์ตรวจสอบ" ซึ่งเป็นเซลล์รีเอเจนต์ที่เคลือบด้วย IgG เพื่อให้แน่ใจว่าการทดสอบทำงานได้อย่างถูกต้อง หากผลการทดสอบเป็นลบจริง เซลล์ตรวจสอบควรทำปฏิกิริยากับแอนติฮิวแมนโกลบูลินที่ไม่จับและแสดงการจับกลุ่มกัน^[³^]^:^716–9

หมู่เลือด

การตรวจหมู่เลือด ABO และ Rh

ในการตรวจหาหมู่เลือด ABO และ Rh จะมีการเติมรีเอเจนต์ที่มีแอนติบอดีต่อแอนติเจน A, B และ RhD ลงในสารแขวนลอยของเซลล์เม็ดเลือด หากมีแอนติเจนที่เกี่ยวข้องอยู่ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะแสดงการจับกลุ่ม (การจับเป็นก้อน) ที่มองเห็นได้ ^{[ 1 ]}^{: 65}นอกจากการระบุแอนติเจน ABO ซึ่งเรียกว่าการจัดกลุ่มแบบไปข้างหน้าแล้ว การตรวจหาหมู่เลือด ABO ตามปกติยังรวมถึงการระบุแอนติบอดี ABO ในพลาสมาของบุคคลนั้นด้วย ซึ่งเรียกว่าการจัดกลุ่มแบบย้อนกลับ^{[ 1 ]}^{: 120}และทำขึ้นเพื่อยืนยันหมู่เลือด ABO ในการจัดกลุ่มแบบย้อนกลับ พลาสมาของบุคคลนั้นจะถูกเติมลงในเซลล์เม็ดเลือดแดงชนิด A1 ชนิด B พลาสมาควรจะจับกลุ่มเซลล์ที่แสดงแอนติเจนที่บุคคลนั้นไม่มี ในขณะที่ไม่จับกลุ่มเซลล์ที่แสดงแอนติเจนเดียวกันกับผู้ป่วย ตัวอย่างเช่น พลาสมาของคนที่มีหมู่เลือด A ควรทำปฏิกิริยากับเซลล์เม็ดเลือดแดงชนิด B แต่ไม่ทำปฏิกิริยากับเซลล์หากผลลัพธ์ที่คาดหวังไม่เกิดขึ้น จำเป็นต้องทำการทดสอบเพิ่มเติม^{[ 7 ]}^{: 595}การจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดงจะถูกให้คะแนนตั้งแต่ 1+ ถึง 4+ โดยพิจารณาจากความแรงของปฏิกิริยา ในการตรวจหาหมู่เลือด ABO คะแนน 3+ หรือ 4+ บ่งชี้ว่ามีปฏิกิริยาเป็นบวก ในขณะที่คะแนน 1+ หรือ 2+ ถือว่าไม่สามารถสรุปผลได้และต้องทำการตรวจสอบเพิ่มเติม^{[ 1 ]}^{: 236}

ระบบหมู่เลือดอื่นๆ

ก่อนรับการถ่ายเลือด บุคคลจะได้รับการตรวจคัดกรองหาแอนติบอดีต่อแอนติเจนของระบบหมู่เลือด ที่ไม่ใช่ ABO ^{[ 5 ]}แอนติเจนหมู่เลือดนอกเหนือจาก ABO และ RhD ที่มีความสำคัญในเวชศาสตร์การถ่ายเลือดได้แก่ แอนติเจน RhC/c และ E/eและแอนติเจนของระบบDuffy , Kell , KiddและMNS ^{[ 1 ]}^{: 158–173}หากตรวจพบแอนติบอดีที่มีนัยสำคัญทางคลินิก ผู้รับจะต้องได้รับการถ่ายเลือดที่ไม่มีแอนติเจนที่เกี่ยวข้องเพื่อป้องกันปฏิกิริยาจากการถ่ายเลือด ซึ่งจำเป็นต้องมีการตรวจหาหมู่เลือดของผู้บริจาคสำหรับแอนติเจนที่เกี่ยวข้อง^{[ 1 ]}^{: 261}ผู้รับอาจได้รับการตรวจหาแอนติเจนเพื่อยืนยันตัวตนของแอนติบอดี เนื่องจากเฉพาะบุคคลที่ไม่มีแอนติเจนหมู่เลือดเท่านั้นที่จะสร้างแอนติบอดีต่อแอนติเจนนั้นได้^{[ 7 ]}^{: 603}

ในยุโรป ผู้หญิงที่ต้องการการถ่ายเลือดมักจะได้รับการตรวจหาหมู่เลือด Kell และแอนติเจน Rh ที่ขยายออกไปเพื่อป้องกันการแพ้แอนติเจนเหล่านี้ ซึ่งอาจทำให้พวกเธอมีความเสี่ยงต่อการเกิดโรคโลหิตจางในทารกแรกเกิดระหว่างตั้งครรภ์^{[ 11 ]}สมาคมโลหิตวิทยาแห่งอเมริกาแนะนำให้ผู้ที่เป็นโรคโลหิตจางชนิดเคียวตรวจหาหมู่เลือด RhC/c, RhE/e, Kell, Duffy, Kidd และ MNS ก่อนการถ่ายเลือด^{[ 12 ]}^{: 130–1}เนื่องจากพวกเขามักต้องการการถ่ายเลือดและอาจแพ้แอนติเจนเหล่านี้หากได้รับการถ่ายเลือดที่ไม่เข้ากัน^{[ 13 ]}นอกจากนี้ยังแนะนำให้ตรวจหาฟีโนไทป์ของเม็ดเลือดแดงแบบขยายสำหรับผู้ที่เป็นโรคธาลัสซีเมียเบต้าด้วย^{[ 14 ]}ระบบหมู่เลือดอื่นนอกเหนือจาก ABO และ Rh มีความเสี่ยงต่อภาวะแทรกซ้อนค่อนข้างน้อยเมื่อเลือดผสมกัน ดังนั้นในกรณีฉุกเฉิน เช่นการตกเลือด อย่างรุนแรง ความเร่งด่วนของการถ่ายเลือดอาจเกินกว่าความจำเป็นในการทดสอบความเข้ากันได้กับระบบหมู่เลือดอื่น (และอาจรวมถึง Rh ด้วย) ^{[ 15 ]}

การตรวจคัดกรองและการระบุแอนติบอดี

แอนติบอดีต่อแอนติเจนหมู่เลือดส่วนใหญ่นอกเหนือจากระบบ ABO จะพัฒนาขึ้นหลังจากการสัมผัสกับเลือดที่ไม่เข้ากัน^{[ 1 ]}^{: 62}แอนติบอดีหมู่เลือด "ที่ไม่คาดคิด" ดังกล่าวพบได้ในประชากรเพียง 0.8–2% เท่านั้น อย่างไรก็ตาม ผู้รับการถ่ายเลือดจะต้องได้รับการตรวจคัดกรองแอนติบอดีเหล่านี้เพื่อป้องกันปฏิกิริยาจากการถ่ายเลือด การตรวจคัดกรองแอนติบอดีจะดำเนินการเป็นส่วนหนึ่งของการดูแลก่อนคลอด ด้วย เนื่องจากแอนติบอดีต่อ RhD และแอนติเจนหมู่เลือดอื่นๆ สามารถทำให้เกิดโรคโลหิตจางในทารกแรกเกิดได้ และเนื่องจากมารดา Rh ลบที่พัฒนาแอนติบอดีต่อ RhD จะไม่สามารถรับRho(D) อิมมูโนโกลบูลิน (Rhogam) ได้ ^{[ 1 ]}^{: 233}

ในขั้นตอนการคัดกรองแอนติบอดี พลาสมาของบุคคลจะถูกเติมลงในแผงเซลล์เม็ดเลือดแดงสองหรือสามชุดที่ได้รับการคัดเลือกให้แสดงแอนติเจนหมู่เลือดที่มีความสำคัญทางคลินิกมากที่สุด เฉพาะเซลล์หมู่ O เท่านั้นที่ใช้ในการคัดกรองแอนติบอดี เนื่องจากมิฉะนั้นเซลล์จะทำปฏิกิริยากับแอนติบอดีหมู่เลือด ABO ที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ ส่วนผสมของพลาสมาและเซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกบ่มที่ 37 °C และทดสอบโดยใช้การทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อม โปรโตคอลการคัดกรองและการระบุแอนติบอดีบางอย่างรวมขั้นตอนการทดสอบหลังจากการบ่มที่อุณหภูมิห้อง แต่มักจะละเว้นขั้นตอนนี้เนื่องจากแอนติบอดีที่ไม่คาดคิดส่วนใหญ่ที่ทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิห้องนั้นไม่มีความสำคัญทางคลินิก^{[ 3 ]}^{: 722–4}

การจับกลุ่มของเซลล์คัดกรองโดยพลาสมา ไม่ว่าจะมีการเติมแอนตี้โกลบูลินของมนุษย์หรือไม่ก็ตาม บ่งชี้ว่ามีแอนติบอดีหมู่เลือดที่ไม่คาดคิดอยู่ หากเกิดกรณีนี้ จำเป็นต้องทำการทดสอบเพิ่มเติมโดยใช้เซลล์มากขึ้น (โดยปกติ 10–11 เซลล์) เพื่อระบุแอนติบอดี โดยการตรวจสอบโปรไฟล์แอนติเจนของเซลล์เม็ดเลือดแดงที่พลาสมาของบุคคลนั้นทำปฏิกิริยาด้วย จะสามารถระบุตัวตนของแอนติบอดีได้ มีการรวม "การควบคุมตนเอง" ซึ่งพลาสมาของบุคคลนั้นจะถูกทดสอบกับเซลล์เม็ดเลือดแดงของตนเอง เพื่อตรวจสอบว่าการจับกลุ่มนั้นเกิดจากอัลโลแอนติบอดี (แอนติบอดีต่อแอนติเจนต่างประเทศ) ออโตแอนติบอดี (แอนติบอดีต่อแอนติเจนของตนเอง) หรือสารรบกวนอื่น ๆ^{[ 3 ]}^{: 722–4}

ภาพด้านบนแสดงการตีความแผงแอนติบอดีที่ใช้ในเซรุ่มวิทยาเพื่อตรวจหาแอนติบอดีต่อแอนติเจนหมู่เลือดที่เกี่ยวข้องมากที่สุด แต่ละแถวแสดงถึงเซลล์เม็ดเลือดแดง "อ้างอิง" หรือ "ควบคุม" ของผู้บริจาคที่มีองค์ประกอบแอนติเจนที่ทราบและมีหมู่เลือด ABO Oสัญลักษณ์ + หมายความว่ามีแอนติเจนอยู่ในเซลล์เม็ดเลือดแดงอ้างอิง และ 0 หมายความว่าไม่มีแอนติเจน nt หมายความว่า "ไม่ได้ทดสอบ" คอลัมน์ "ผลลัพธ์" ทางด้านขวาแสดงปฏิกิริยาเมื่อผสมเซลล์เม็ดเลือดแดงอ้างอิงกับพลาสมาจากผู้ป่วยใน 3 ระยะที่แตกต่างกัน ได้แก่ อุณหภูมิห้อง 37 °C และ AHG (ด้วยแอนติโกลบูลินของมนุษย์ โดยการทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อม ) ^{[ 16 ]}

ขั้นตอนที่ 1 ; ระบุด้วยสีน้ำเงิน: เริ่มต้นด้วยการยกเว้นแอนติเจนที่ไม่มีปฏิกิริยาในทั้ง 3 เฟส โดยดูที่แถวเซลล์อ้างอิงแรกที่ไม่มีปฏิกิริยา (0 ในคอลัมน์ด้านขวา ในกรณีนี้คือผู้บริจาคเซลล์ 2) และยกเว้น (ทำเครื่องหมายด้วย X) แอนติเจนที่มีอยู่แต่ละตัวที่คู่อื่นแทบจะไม่มีอยู่เลย (เช่นสำหรับ DT) หรือเป็น 0 (การมีอยู่เป็นแบบโฮโมไซกัส ในกรณีนี้คือโฮโมไซกัส c) เมื่อทั้งสองคู่เป็น + (กรณีเฮเทอโรไซกัส) ทั้งสองคู่จะถูกยกเว้น (ทำเครื่องหมายด้วย X) ยกเว้นแอนติเจน C/c, E/e, Duffy, Kidd และ MNS (ซึ่งแอนติบอดีของผู้ป่วยอาจยังคงมีปฏิกิริยาต่อเซลล์เม็ดเลือดที่มีการแสดงออกของแอนติเจนแบบโฮโมไซกัส เนื่องจากการแสดงออกแบบโฮโมไซกัสส่งผลให้มีปริมาณแอนติเจนสูงขึ้น) ^{[ 17 ]}ดังนั้น ในกรณีนี้ E/e จะไม่ถูกยกเว้นในแถวนี้ ในขณะที่ K/k ถูกยกเว้น เช่นเดียวกับJs ^b (โดยไม่คำนึงถึงสิ่งที่ Js ^aจะแสดง) ^{[หมายเหตุ 2 ]}
ขั้นตอนที่ 2 : ระบุด้วยสีน้ำตาล: ไปที่แถวเซลล์อ้างอิงถัดไปที่มีปฏิกิริยาเชิงลบ (ในกรณีนี้คือเซลล์ผู้บริจาคหมายเลข 4) และทำซ้ำสำหรับแอนติเจนแต่ละประเภทที่ยังไม่ได้ถูกคัดออก
ขั้นตอนที่ 3 : ทำเครื่องหมายด้วยสีม่วง ทำซ้ำขั้นตอนเดียวกันสำหรับแถวเซลล์อ้างอิงแต่ละแถวที่มีปฏิกิริยาเชิงลบ
ขั้นตอนที่ 4 : ตัดแอนติเจนที่ไม่มีอยู่ในกรณีที่มีปฏิกิริยาทั้งหมดหรือเกือบทั้งหมด (ในที่นี้ทำเครื่องหมายด้วย \) ออก แอนติเจนเหล่านี้มักมีอุบัติการณ์ต่ำ และถึงแม้จะมีความเป็นไปได้ที่จะมีการสร้างแอนติบอดีดังกล่าว แต่โดยทั่วไปแล้วจะไม่ใช่แอนติบอดีชนิดที่ก่อให้เกิดปฏิกิริยาในกรณีนี้
ขั้นตอนที่ 5 : เปรียบเทียบแอนติเจนที่เหลืออยู่ที่เป็นไปได้กับตัวการที่น่าจะเป็นไปได้มากที่สุด (ในกรณีนี้คือFy ^a ) และตัดแอนติเจนที่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญออกไป เช่น เซลล์ผู้บริจาคชนิดเพิ่มเติมที่แสดงไว้ ซึ่งเป็นที่ทราบกันว่าไม่มี Fy ^aแต่มี C และJk ^a

ในกรณีนี้ แผงแอนติบอดีแสดงให้เห็นว่ามีแอนติบอดีต่อ Fy ^aอยู่ ซึ่งบ่งชี้ว่าต้องใช้เลือดของผู้บริจาคที่มีหมู่เลือดเป็นลบสำหรับแอนติเจน Fy ^{a อย่างไรก็ตาม หาก}การจับคู่ข้าม ในภายหลัง แสดงปฏิกิริยา ควรทำการทดสอบเพิ่มเติมกับแอนติเจนที่ถูกตัดออกไปก่อนหน้านี้ (ในกรณีนี้อาจเป็น E, C ^W , Kp ^aและ/หรือ Lu ^a ) ^{[ 16 ]}

การยับยั้งการจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดง^{[ 17 ]}
สารทำให้เป็นกลาง	แอนติเจนถูกยกเลิก
ของเหลวในถุงซีสต์ไฮดาติด ไข่นกพิราบ	หน้า
น้ำลาย	เอช, ลี
น้ำนมแม่	ฉัน
ปัสสาวะหนูตะเภา	สด^เอ

เมื่อมีแอนติบอดีหลายตัว หรือเมื่อแอนติบอดีมุ่งเป้าไปที่แอนติเจนที่มีความถี่สูง ขั้นตอนการตรวจแอนติบอดีตามปกติอาจไม่สามารถระบุได้อย่างแน่ชัด ในกรณีเหล่านี้สามารถใช้การยับยั้งการจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดงได้โดยสารที่ทำให้เป็นกลางจะกำจัดแอนติเจนเฉพาะ^{[ 17 ]}หรืออีกทางหนึ่ง อาจนำพลาสมาไปบ่มกับเซลล์ที่มีโปรไฟล์แอนติเจนที่ทราบแล้ว เพื่อกำจัดแอนติบอดีเฉพาะ (กระบวนการที่เรียกว่าการดูดซับ ) หรืออาจบำบัดเซลล์ด้วยเอนไซม์เช่นฟิเคนหรือปาเปนซึ่งยับยั้งปฏิกิริยาของแอนติบอดีหมู่เลือดบางชนิดและเพิ่มปฏิกิริยาของแอนติบอดีหมู่เลือดอื่นๆ^{[ 3 ]}^{: 723–9}ผลของฟิเคนและปาเปนต่อระบบหมู่เลือดหลักมีดังนี้: ^{[ 18 ]}^{[ 19 ]}

ปรับปรุงแล้ว: ABO , Rh , Kidd , Lewis , P1 , Ii
ถูกทำลาย: ดัฟฟี่ (Fy ^aและ Fy ^b ), ลูเธอรัน , MNS
ไม่ได้รับผลกระทบ: เคลล์

ผู้ที่มีผลตรวจแอนติบอดีหมู่เลือดผิดปกติเป็นบวกในอดีตอาจไม่แสดงปฏิกิริยาเป็นบวกในการตรวจครั้งถัดไป อย่างไรก็ตาม หากแอนติบอดีมีความสำคัญทางคลินิก พวกเขาจะต้องได้รับการถ่ายเลือดที่ไม่มีแอนติเจนไม่ว่ากรณีใดๆ ก็ตาม^{[ 20 ]}

การจับคู่ข้าม

การจับคู่เลือด (Crossmatching) ซึ่งดำเนินการเป็นประจำก่อนการถ่ายเลือด เกี่ยวข้องกับการเพิ่มพลาสมาของผู้รับลงในตัวอย่างเม็ดเลือดแดงของผู้บริจาค หากเลือดไม่เข้ากัน แอนติบอดีในพลาสมาของผู้รับจะจับกับแอนติเจนบนเม็ดเลือดแดงของผู้บริจาค ปฏิกิริยาแอนติบอดี-แอนติเจนนี้สามารถตรวจพบได้จากการจับกลุ่มหรือการทำลายเม็ดเลือดแดงที่มองเห็นได้ หรือจากปฏิกิริยากับแอนติฮิวแมนโกลบูลินหลังจากการปั่นเหวี่ยง^{[ 7 ]}^{: 600–3}

หากผู้รับการถ่ายเลือดมีผลการตรวจคัดกรองแอนติบอดีเป็นลบและไม่มีประวัติแอนติบอดี มักจะทำการทดสอบครอสแมทช์แบบ "ปั่นทันที" โดยนำเม็ดเลือดแดงและพลาสมาไปปั่นเหวี่ยงทันทีหลังจากผสมกัน เพื่อตรวจสอบความไม่เข้ากันของหมู่เลือด ABO เป็นครั้งสุดท้าย หากตรวจพบแอนติบอดีที่มีนัยสำคัญทางคลินิก (หรือเคยตรวจพบในอดีต) หรือหากการทดสอบครอสแมทช์แบบปั่นทันทีแสดงให้เห็นถึงความไม่เข้ากัน จะทำการทดสอบครอสแมทช์แบบ "เต็มรูปแบบ" หรือ "IgG crossmatch" ซึ่งใช้การทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อมเพื่อตรวจหาความไม่เข้ากันของหมู่เลือดที่เกิดจากแอนติบอดี IgG ขั้นตอนการทดสอบครอสแมทช์ IgG ใช้เวลานานกว่าการทดสอบครอสแมทช์แบบปั่นทันที และในบางกรณีอาจใช้เวลานานกว่าสองชั่วโมง^{[ 20 ]}

บุคคลที่มีผลการตรวจคัดกรองแอนติบอดีเป็นลบและไม่มีประวัติแอนติบอดีมาก่อน อาจเข้ารับการตรวจ "การจับคู่ทางอิเล็กทรอนิกส์" ได้ หากทราบหมู่เลือด ABO และ Rh จากตัวอย่างเลือดปัจจุบัน และมีผลการตรวจหมู่เลือด ABO/Rh อื่นๆ บันทึกไว้ ในกรณีนี้ จะทำการเปรียบเทียบหมู่เลือดของผู้รับกับหมู่เลือดของผู้บริจาค โดยไม่จำเป็นต้องมีการตรวจทางซีรัมวิทยา^{[ 7 ]}^{: 600–3}ในกรณีฉุกเฉิน อาจมีการจ่ายเลือดก่อนที่การจับคู่จะเสร็จสมบูรณ์^{[ 1 ]}^{: 262–3}

วิธีการ

วิธีการหลอดและสไลด์

หมู่เลือดโดยวิธีสไลด์: หมู่เลือดเอบวก

การตรวจหมู่เลือดสามารถทำได้โดยใช้หลอดทดลองไมโครเพลทหรือสไลด์ตรวจหมู่เลือด วิธีการใช้หลอดทดลองเกี่ยวข้องกับการผสมสารแขวนลอยของเม็ดเลือดแดงกับแอนติเซรัม (หรือพลาสมา สำหรับการตรวจหมู่เลือดแบบย้อนกลับ) ในหลอดทดลอง จากนั้นนำส่วนผสมไปปั่นเหวี่ยงเพื่อแยกเซลล์ออกจากสารรีเอเจนต์ แล้วจึงนำกลับมาแขวนลอยอีกครั้งโดยการเขย่าหลอดเบาๆ หากมีแอนติเจนที่สนใจอยู่ เม็ดเลือดแดงจะจับตัวกันเป็นก้อนแข็งในหลอดทดลอง หากไม่มีแอนติเจน เม็ดเลือดแดงจะกลับไปเป็นสารแขวนลอยเมื่อผสม^{[ 7 ]}^{: 611–12}^{[ 9 ]}^{: 214} วิธีการใช้ไมโครเพลทคล้ายกับวิธีการใช้หลอดทดลอง ยกเว้นว่าแทนที่จะใช้หลอดทดลองแต่ละหลอด การตรวจหมู่เลือดจะทำในเพลทที่มีหลุมหลายสิบหลุม ทำให้สามารถทำการทดสอบหลายอย่างพร้อมกันได้ ปฏิกิริยาการจับตัวกันจะถูกอ่านหลังจากนำเพลทไปปั่นเหวี่ยง^{[ 21 ]}^{: 201}

การคัดกรองและการระบุแอนติบอดีสามารถทำได้โดยวิธีหลอดทดลอง ในขั้นตอนนี้ พลาสมาและเซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกผสมเข้าด้วยกันในหลอดทดลองที่มีตัวกลางที่ช่วยเพิ่มปฏิกิริยาการจับกลุ่ม เช่นสารละลายเกลือที่มีความเข้มข้นของไอออนต่ำ (LISS) หลอดทดลองจะถูกบ่มที่อุณหภูมิร่างกายเป็นระยะเวลาที่กำหนด จากนั้นนำไปปั่นเหวี่ยงและตรวจสอบการจับกลุ่มหรือการแตกตัวของเม็ดเลือดแดง โดยตรวจสอบทันทีหลังจากระยะเวลาการบ่ม และตรวจสอบอีกครั้งหลังจากล้างและเติมสารรีเอเจนต์แอนติฮิวแมนโกลบูลิน^{[ 3 ]}^{: 722}การจับคู่เลือดแบบไขว้ก็สามารถทำได้โดยวิธีหลอดทดลองเช่นกัน โดยจะอ่านปฏิกิริยาทันทีหลังจากปั่นเหวี่ยงในการจับคู่เลือดแบบไขว้แบบปั่นเหวี่ยงทันที หรือหลังจากบ่มและเติม AHG ในการจับคู่เลือดแบบไขว้แบบเต็มรูปแบบ^{[ 3 ]}^{: 725}

วิธีการตรวจหาหมู่เลือดโดยใช้สไลด์เกี่ยวข้องกับการผสมเลือดหนึ่งหยดกับแอนติเซรัมหนึ่งหยดบนสไลด์ เอียงสไลด์เพื่อผสมเซลล์และสารรีเอเจนต์เข้าด้วยกัน จากนั้นสังเกตการจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดง ซึ่งบ่งชี้ว่าผลเป็นบวก วิธีนี้มักใช้ในพื้นที่ที่มีทรัพยากรจำกัดหรือสถานการณ์ฉุกเฉิน มิเช่นนั้นจะนิยมใช้วิธีอื่น^{[ 9 ]}^{: 214}^{[ 10 ]}^{: 476}

การจับกลุ่มของคอลัมน์

เทคนิคการจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดงในคอลัมน์สำหรับการทดสอบความเข้ากันได้ของเลือด (บางครั้งเรียกว่า "การทดสอบเจล") ใช้การ์ดที่มีคอลัมน์ของเจลเดกซ์แทรน - โพลีอะคริลาไมด์ การ์ดที่ออกแบบมาสำหรับการตรวจหมู่เลือดจะมีน้ำยาตรวจหมู่เลือดที่เตรียมไว้ล่วงหน้าสำหรับการตรวจหมู่เลือดแบบไปข้างหน้า และช่องที่มีเฉพาะสารละลายบัฟเฟอร์ซึ่งจะเติมเม็ดเลือดแดงและพลาสมาที่เป็นน้ำยาตรวจหมู่เลือดลงไปสำหรับการตรวจหมู่เลือดแบบย้อนกลับ การตรวจคัดกรองแอนติบอดีและการจับคู่ข้ามสายพันธุ์ก็สามารถทำได้โดยใช้การจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดงในคอลัมน์เช่นกัน ในกรณีนี้จะใช้การ์ดที่มีน้ำยาแอนติฮิวแมนโกลบูลิน การ์ดเจลจะถูกปั่นเหวี่ยง (บางครั้งหลังจากบ่ม ขึ้นอยู่กับการทดสอบ) ในระหว่างนั้นเม็ดเลือดแดงที่จับกลุ่มกันจะถูกดักจับอยู่ที่ด้านบนของคอลัมน์เนื่องจากมีขนาดใหญ่เกินกว่าจะเคลื่อนที่ผ่านเจลได้ เซลล์ที่ไม่จับกลุ่มกันจะสะสมอยู่ที่ด้านล่าง ดังนั้นเส้นของเม็ดเลือดแดงที่ด้านบนของคอลัมน์จึงบ่งชี้ว่าผลเป็นบวก ความแรงของปฏิกิริยาเชิงบวกจะถูกให้คะแนนตั้งแต่ 1+ ถึง 4+ ขึ้นอยู่กับว่าเซลล์เคลื่อนที่ผ่านเจลไปไกลแค่ไหน การทดสอบด้วยเจลมีข้อดีเหนือกว่าวิธีการแบบแมนนวลตรงที่ช่วยขจัดความแปรปรวนที่เกี่ยวข้องกับการแขวนลอยเซลล์ด้วยมือ และสามารถเก็บการ์ดไว้เป็นบันทึกการทดสอบได้^{[ 1 ]}^{: 269–71}วิธีการจับกลุ่มของคอลัมน์ถูกใช้โดยเครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติ บางชนิด เพื่อทำการตรวจหาหมู่เลือดโดยอัตโนมัติ^{[ 7 ]}^{: 590}เครื่องวิเคราะห์เหล่านี้จะใช้ปิเปตดูดเซลล์เม็ดเลือดแดงและพลาสมาลงบนการ์ดเจล ปั่นเหวี่ยง และสแกนและอ่านปฏิกิริยาการจับกลุ่มเพื่อกำหนดหมู่เลือด^{[ 1 ]}^{: 270–1}

การวิเคราะห์เฟสของแข็ง

การทดสอบแบบเฟสของแข็ง (บางครั้งเรียกว่าวิธี "จับแอนติเจน") ใช้แอนติเจนหรือแอนติบอดีรีเอเจนต์ที่ติดอยู่กับพื้นผิว (โดยปกติคือไมโครเพลท) ^{[ 9 ]}^{: 214}หลุมไมโครเพลทที่เคลือบด้วยรีเอเจนต์แอนติ-A, -B และ -D ใช้สำหรับการจัดกลุ่มไปข้างหน้า เติมตัวอย่างทดสอบและนำไมโครเพลทไปปั่นเหวี่ยง ในกรณีที่เกิดปฏิกิริยาบวก เซลล์เม็ดเลือดแดงจะเกาะติดกับพื้นผิวของหลุม^{[ 7 ]}^{: 590}^{[ 10 ]}^{: 477}เครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติบางเครื่องใช้การทดสอบแบบเฟสของแข็งสำหรับการตรวจหมู่เลือด^{[ 1 ]}^{: 275–6}

การตรวจวิเคราะห์จีโนไทป์

การตรวจทางพันธุกรรมสามารถใช้เพื่อกำหนดหมู่เลือดของบุคคลได้ในบางสถานการณ์ที่การตรวจทางซีรั่มวิทยาไม่เพียงพอ ตัวอย่างเช่น หากบุคคลได้รับการถ่ายเลือดจากผู้บริจาคในปริมาณมาก ผลการตรวจทางซีรั่มวิทยาจะสะท้อนถึงแอนติเจนบนเซลล์ของผู้บริจาค ไม่ใช่หมู่เลือดที่แท้จริงของบุคคลนั้น^{[ 11 ]}บุคคลที่สร้างแอนติบอดีต่อเซลล์เม็ดเลือดแดงของตนเอง^{[ 21 ]}^{: 202}หรือผู้ที่ได้รับการรักษาด้วยยาบางชนิดอาจแสดงปฏิกิริยาการจับกลุ่มที่ผิดพลาดในการตรวจทางซีรั่มวิทยา ดังนั้นการตรวจจีโนไทป์อาจจำเป็นเพื่อกำหนดหมู่เลือดของพวกเขาได้อย่างแม่นยำ^{[ 1 ]}^{: 261}การตรวจทางพันธุกรรมเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการตรวจหมู่แอนติเจนของเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ไม่มีแอนติเซรัมเชิงพาณิชย์ให้บริการ^{[ 11 ]}

AABB แนะนำให้ ตรวจหาจีโนไทป์ ของ เซลล์เม็ดเลือดแดงสำหรับผู้หญิงที่มี ฟีโนไทป์ D อ่อน ทางซีรัมวิทยา ที่มีศักยภาพในการมีบุตร^{[ 22 ]}^{[ 23 ]}ทั้งนี้เนื่องจากผู้ที่มีฟีโนไทป์ D อ่อนบางประเภทสามารถสร้างแอนติบอดีต่อแอนติเจน RhD ได้ ในขณะที่ผู้ที่มีฟีโนไทป์ D อ่อนบางประเภทไม่สามารถสร้างแอนติบอดีได้ แอนติบอดีดังกล่าวสามารถทำให้เกิดโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกในทารกในครรภ์และทารกแรกเกิด ( HDFN ) การตรวจหาจีโนไทป์สามารถระบุชนิดของแอนติเจน D อ่อนที่เฉพาะเจาะจง ซึ่งจะกำหนดศักยภาพของบุคคลในการสร้างแอนติบอดี จึงช่วยหลีกเลี่ยงการรักษาที่ไม่จำเป็นด้วย อิมมูโนโกลบูลิ นRho(D) ^{[ 24 ]}การตรวจหาจีโนไทป์เป็นที่นิยมมากกว่าการทดสอบทางซีรัมวิทยาสำหรับผู้ที่เป็นโรคโลหิตจางเคียว เนื่องจากมีความแม่นยำมากกว่าสำหรับแอนติเจนบางชนิดและสามารถระบุแอนติเจนที่ไม่สามารถตรวจพบได้ด้วยวิธีทางซีรัมวิทยา^{[ 25 ]}^{[ 13 ]}

การตรวจหาจีโนไทป์ยังใช้ในการตรวจก่อนคลอดเพื่อตรวจหาโรคโลหิตจางในทารกแรกเกิด เมื่อหญิงตั้งครรภ์มีแอนติบอดีหมู่เลือดที่อาจทำให้เกิด HDN ทารกในครรภ์สามารถตรวจหาแอนติเจนที่เกี่ยวข้องเพื่อพิจารณาว่ามีความเสี่ยงต่อการเกิดโรคหรือไม่ เนื่องจากไม่สะดวกที่จะเจาะเลือดจากทารกในครรภ์ จึงใช้ ตัวอย่าง น้ำคร่ำหรือดีเอ็นเอของทารกในครรภ์ที่แยกได้จากเลือดของมารดาในการ ตรวจหาหมู่เลือด ^{[ 21 ]}^{: 202}^{[ 22 ]}บิดาอาจได้รับการตรวจหาจีโนไทป์เพื่อทำนายความเสี่ยงของโรคโลหิตจางในทารกแรกเกิดได้เช่นกัน เพราะหากบิดาเป็นโฮโมไซกัสสำหรับแอนติเจนที่เกี่ยวข้อง (หมายถึงมีสำเนาของยีนสองชุด) ทารกจะมีแอนติเจนเป็นบวกและมีความเสี่ยงต่อการเกิดโรค หากบิดาเป็นเฮเทโรไซกัส (มีสำเนาเพียงชุดเดียว) ทารกจะมีโอกาสเป็นบวกต่อแอนติเจนเพียง 50% เท่านั้น^{[ 11 ]}

ข้อจำกัด

ความคลาดเคลื่อนของหมู่เลือด ABO

ในการตรวจหาหมู่เลือด ABO ผลลัพธ์ของการจัดกลุ่มแบบไปข้างหน้าและแบบย้อนกลับควรตรงกันเสมอ ความแตกต่างที่ไม่คาดคิดระหว่างผลลัพธ์ทั้งสองเรียกว่าความคลาดเคลื่อนของหมู่เลือด ABO และต้องได้รับการแก้ไขก่อนที่จะรายงานหมู่เลือดของบุคคลนั้น^{[ 1 ]}^{: 136}

การจัดกลุ่มไปข้างหน้า

ปฏิกิริยาที่อ่อนแอในการจัดกลุ่มไปข้างหน้าอาจเกิดขึ้นในผู้ที่อยู่ในกลุ่มย่อย ABO บางกลุ่ม ซึ่งเป็นหมู่เลือดที่แปรผันซึ่งมีลักษณะเฉพาะคือการแสดงออกของแอนติเจน A หรือ B ลดลงหรือมีการเปลี่ยนแปลงในโครงสร้างของแอนติเจน การแสดงออกของแอนติเจน ABO ที่อ่อนแอลงอาจเกิดขึ้นในโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวและมะเร็งต่อมน้ำเหลืองฮอดจ์กิน ได้เช่น กัน ปฏิกิริยาที่อ่อนแอในการจัดกลุ่มไปข้างหน้าสามารถเสริมให้แข็งแรงขึ้นได้โดยการบ่มเลือดและส่วนผสมของรีเอเจนต์ที่อุณหภูมิห้องหรือ4 °C (39 °F)หรือโดยการใช้เอนไซม์ บางชนิด เพื่อเพิ่มปฏิกิริยาแอนติเจน-แอนติบอดี^[¹^]^:¹³⁹

บางครั้งอาจพบเซลล์เม็ดเลือดแดงสองกลุ่มหลังจากทำปฏิกิริยากับแอนติเซรัมสำหรับตรวจหมู่เลือด เซลล์เม็ดเลือดแดงบางส่วนจับตัวกัน ในขณะที่บางส่วนไม่จับตัวกัน ทำให้ยากต่อการตีความผลลัพธ์ ปรากฏการณ์นี้เรียกว่าปฏิกิริยาผสม (mixed field reaction ) และอาจเกิดขึ้นได้หากผู้ป่วยเพิ่งได้รับการถ่ายเลือดที่มีหมู่เลือดต่างกัน (เช่น ผู้ป่วยหมู่เลือด A ได้รับเลือดหมู่เลือด O) หากได้รับ การปลูกถ่าย ไขกระดูกหรือสเต็มเซลล์จากผู้ที่มีหมู่เลือดต่างกัน หรือในผู้ป่วยที่มีหมู่เลือด ABO บางกลุ่ม เช่น A3 ตรวจสอบประวัติทางการแพทย์ของผู้ป่วยสามารถชี้แจงสาเหตุของปฏิกิริยาผสมได้^{[ 1 ]}^{: 138}^{[ 26 ]}^{: 314}

ผู้ป่วยโรคแอนติบอดีจับกลุ่มเม็ดเลือดแดงที่อุณหภูมิต่ำจะสร้างแอนติบอดีต่อเม็ดเลือดแดงของตนเอง ทำให้เม็ดเลือดแดงจับกลุ่มกันเองที่อุณหภูมิห้อง ส่งผลให้เกิดปฏิกิริยาบวกเท็จในการจัดกลุ่มแบบไปข้างหน้า โดยปกติแล้วแอนติบอดีจับกลุ่มเม็ดเลือดแดงที่อุณหภูมิต่ำสามารถทำให้ไม่ทำงานได้โดยการอุ่นตัวอย่างที่อุณหภูมิ37 °C (99 °F)และล้างเม็ดเลือดแดงด้วยน้ำเกลือ หากวิธีนี้ไม่ได้ผล สามารถใช้ ไดไทโอไทรทอลเพื่อทำลายแอนติบอดีได้^[¹^]^:¹⁴¹

ตัวอย่างเลือดจากสายสะดืออาจปนเปื้อนด้วยวาร์ตันเจลลี่ซึ่งเป็นสารเหนียวที่สามารถทำให้เม็ดเลือดแดงเกาะติดกัน ทำให้เกิดอาการคล้ายการจับกลุ่มกัน สามารถกำจัดวาร์ตันเจลลี่ได้โดยการล้างเม็ดเลือดแดงให้สะอาด^{[ 1 ]}^{: 141}

ในปรากฏการณ์ที่หายากที่เรียกว่า "แอนติเจน B ที่ได้มา" ผู้ป่วยที่มีหมู่เลือดจริงเป็น A อาจแสดงผลบวกอ่อนๆ สำหรับ B ในการจัดกลุ่มแบบไปข้างหน้า สภาวะนี้ซึ่งเกี่ยวข้องกับโรคทางเดินอาหาร เช่นมะเร็งลำไส้ใหญ่^{[ 1 ]}^{: 139}และการอุดตันของลำไส้ [ ²⁶^]^:¹²⁶เกิดจากการเปลี่ยนแอนติเจน A ไปเป็นโครงสร้างที่เลียนแบบแอนติเจน B โดยเอนไซม์ของแบคทีเรีย^[¹⁰^]^:⁴⁷⁷^แตกต่างจากแอนติเจน B ที่แท้จริง แอนติเจน B ที่ได้มาจะไม่ทำปฏิกิริยากับรีเอเจนต์ในช่วง pH ที่กำหนด^[¹^]^:¹³⁹

การจัดกลุ่มแบบย้อนกลับ

ทารกอายุต่ำกว่า 3 ถึง 6 เดือนมักแสดงปฏิกิริยาที่ขาดหายไปหรืออ่อนแอในการจัดกลุ่มแบบย้อนกลับ เนื่องจากพวกเขาสร้างแอนติบอดี ABO ในระดับต่ำมาก^{[ 1 ]}^{: 136}ดังนั้นโดยทั่วไปจึงไม่ทำการจัดกลุ่มแบบย้อนกลับสำหรับกลุ่มอายุนี้^{[ 10 ]}^{: 486}ผู้สูงอายุอาจแสดงการผลิตแอนติบอดีลดลง เช่นเดียวกับผู้ที่มีภาวะไฮโปแกมมาโกลบูลินีเมีย ปฏิกิริยาที่อ่อนแอสามารถเสริมให้แข็งแรงขึ้นได้โดยการปล่อยให้พลาสมาและเซลล์เม็ดเลือดแดงบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 ถึง 30 นาที และหากวิธีนี้ไม่ได้ผล สามารถบ่มที่อุณหภูมิ4 °C (39 °F)ได้^[¹^]^:^137–8

ประมาณ 20% ของผู้ที่มีหมู่เลือด A หรือ AB อยู่ในกลุ่มย่อยของหมู่เลือด A ที่เรียกว่า A2 ขณะที่กลุ่มย่อยที่พบได้บ่อยกว่า ซึ่งครอบคลุมประมาณ 80% ของบุคคล เรียกว่า A1 ความแตกต่างเล็กน้อยในโครงสร้างของแอนติเจน A1 A2 บางคนในกลุ่มย่อย A2 จึงสร้างแอนติบอดีต่อ A1 ได้บุคคลเหล่านี้จะมีผลการตรวจหมู่เลือดเป็น A หรือ AB ในการตรวจหมู่เลือดแบบปกติ แต่จะแสดงปฏิกิริยาบวกที่ไม่คาดคิดกับเซลล์เม็ดเลือดแดงหมู่เลือด A1 การตรวจหมู่เลือดแบบย้อนกลับ ความไม่สอดคล้องกันนี้สามารถแก้ไขได้โดยการทดสอบเซลล์เม็ดเลือดแดงของบุคคลนั้นด้วยรีเอเจนต์แอนติ-A1 จะให้ผลลบหากผู้ป่วยอยู่ในกลุ่มย่อยถือว่าไม่มีนัยสำคัญทางคลินิกเว้นแต่จะทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ37 °C (99 °F)กลุ่มย่อยอื่นๆ ของหมู่เลือด A ก็มีอยู่เช่นกัน รวมถึงกลุ่มย่อยของหมู่เลือด B แต่พบได้น้อยมาก^[¹^]^:^127–32

หาก มี โปรตีนในพลาสมาของบุคคลนั้นในปริมาณสูง อาจเกิดปรากฏการณ์ที่เรียกว่ารูโล (rouleaux)เมื่อเติมพลาสมาลงในเซลล์รีเอเจนต์ รูโลทำให้เม็ดเลือดแดงเรียงตัวกัน ซึ่งอาจเลียนแบบการจับกลุ่มกัน ทำให้เกิดผลบวกเท็จในการจัดกลุ่มแบบย้อนกลับ สามารถหลีกเลี่ยงได้โดยการนำพลาสมาออก แทนที่ด้วยน้ำเกลือ และปั่นเหวี่ยงหลอดทดลองอีกครั้ง รูโลจะหายไปเมื่อเปลี่ยนพลาสมาด้วยน้ำเกลือ แต่การจับกลุ่มกันที่แท้จริงจะยังคงอยู่^{[ 1 ]}^{: 140–1}

แอนติบอดีต่อแอนติเจนหมู่เลือดอื่นที่ไม่ใช่ A และ B อาจทำปฏิกิริยากับเซลล์รีเอเจนต์ที่ใช้ในการจัดกลุ่มแบบย้อนกลับ หาก มี ออโตแอนติบอดีที่ทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิต่ำ ผลบวกปลอมสามารถแก้ไขได้โดยการอุ่นตัวอย่างให้ร้อนถึง37 °C (99 °F)หากผลลัพธ์เกิดจากอัลโลแอนติบอดี สามารถทำการตรวจคัดกรองแอนติบอดีเพื่อระบุแอนติบอดีได้^[⁷^]^:^141–2และสามารถทำการจัดกลุ่มแบบย้อนกลับโดยใช้ตัวอย่างที่ไม่มีแอนติเจนที่เกี่ยวข้อง^[¹⁰^]^:⁴⁷⁷

ฟีโนไทป์ D อ่อน

ประมาณ 0.2 ถึง 1% ของประชากรมีฟีโนไทป์ "D อ่อน" ^{[ 27 ]}หมายความว่าพวกเขามีแอนติเจน RhD เป็นบวก แต่แสดงปฏิกิริยาอ่อนหรือเป็นลบกับรีเอเจนต์ต่อต้าน RhD บางชนิดเนื่องจากการแสดงออกของแอนติเจนลดลงหรือโครงสร้างแอนติเจนที่ผิดปกติ หากการทดสอบทางซีรั่มวิทยาตามปกติสำหรับ RhD ได้คะแนน 2+ หรือน้อยกว่า สามารถใช้การทดสอบแอนติโกลบูลินเพื่อแสดงการมีอยู่ของ RhD ได้^{[ 1 ]}^{: 159}การทดสอบ D อ่อนยังดำเนินการกับผู้บริจาคโลหิตที่ในตอนแรกมีหมู่เลือด RhD เป็นลบ^{[ 22 ]}ในอดีต ผู้บริจาคโลหิตที่มี D อ่อนจะได้รับการรักษาเป็น Rh บวก และผู้ป่วยที่มี D อ่อนจะได้รับการรักษาเป็น Rh ลบ เพื่อหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับเลือดที่ไม่เข้ากัน การตรวจจีโนไทป์ถูกนำมาใช้มากขึ้นเรื่อยๆ เพื่อกำหนดพื้นฐานทางโมเลกุลของฟีโนไทป์ D ที่อ่อนแอ เนื่องจากวิธีนี้จะกำหนดว่าบุคคลที่มี D ที่อ่อนแอสามารถสร้างแอนติบอดีต่อ RhD หรือทำให้ผู้อื่นไวต่อแอนติเจน RhD ได้หรือไม่^{[ 27 ]}

การกระตุ้นแอนติบอดีของเซลล์เม็ดเลือดแดง

การทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อมซึ่งใช้สำหรับการทดสอบ D ที่อ่อนแอและการจำแนกประเภทของแอนติเจนเม็ดเลือดแดงบางชนิด ตรวจจับ IgG ที่จับกับเม็ดเลือดแดง หาก IgG จับกับเม็ดเลือดแดงในร่างกายซึ่งอาจเกิดขึ้นในภาวะโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิคุ้มกันตนเองโรคเม็ดเลือดแดงแตกในทารกแรกเกิด และปฏิกิริยาจากการถ่ายเลือด^{[ 10 ]}^{: 260}การทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อมจะให้ผลบวกเสมอ โดยไม่คำนึงถึงการมีอยู่ของแอนติเจนที่เกี่ยวข้อง^{[ 10 ]}^{: 477–8} สามารถทำการ ทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงเพื่อแสดงให้เห็นว่าปฏิกิริยาบวกเกิดจากการทำให้เม็ดเลือดแดงไวต่อสารก่อภูมิแพ้^{[ 28 ]}^{: 289}

การตรวจอื่นๆ ก่อนการให้เลือด

กลุ่มคนบางกลุ่มมีความต้องการการถ่ายเลือดที่เฉพาะเจาะจง ทารกในครรภ์ ทารกที่มีน้ำหนักแรกเกิดต่ำมากและ ผู้ที่ มีภูมิคุ้มกันบกพร่องมีความเสี่ยงต่อการติดเชื้อไซโตเมกาไวรัส (CMV) อย่างรุนแรง ซึ่งเป็นเชื้อก่อโรคฉวยโอกาสที่ผู้บริจาคโลหิตประมาณ 50% ตรวจพบเชื้อนี้ และอาจต้องถ่ายเลือดที่ปราศจาก CMV เพื่อป้องกันการติดเชื้อ^{[ 3 ]}^{: 749}^{[ 29 ]}ผู้ที่มีความเสี่ยงต่อการเกิดโรคกราฟต์ต่อโฮสต์เช่น ผู้รับ การปลูกถ่ายไขกระดูกจะได้รับเลือดที่ผ่านการฉายรังสีเพื่อยับยั้งทีลิมโฟไซต์ซึ่งเป็นสาเหตุของปฏิกิริยานี้ ผู้ที่เคยมีอาการแพ้ อย่างรุนแรง ต่อการถ่ายเลือดในอดีตอาจต้องถ่ายเลือดที่ผ่านการ "ล้าง" เพื่อกำจัดพลาสมา^{[ 1 ]}^{: 342–5}ประวัติของผู้ป่วยจะได้รับการตรวจสอบเพื่อดูว่าเคยมีการระบุแอนติบอดีและความผิดปกติทางซีรัมวิทยาอื่นๆ มาก่อนหรือไม่

การทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรง ( การทดสอบ Coombs ) จะดำเนินการเป็นส่วนหนึ่งของการตรวจสอบแอนติบอดีด้วย^{[ 30 ]}

โดยทั่วไปแล้วเลือดของผู้บริจาคจะได้รับ การตรวจคัด กรองการติดเชื้อที่ถ่ายทอดผ่านการให้เลือดเช่นHIVณ ปี 2018 องค์การอนามัยโลกรายงานว่าเกือบ 100% ของการบริจาคเลือดในประเทศที่มีรายได้สูงและรายได้ปานกลางค่อนข้างสูงได้รับการตรวจคัดกรองโรคติดเชื้อ แต่ตัวเลขสำหรับประเทศที่มีรายได้ปานกลางค่อนข้างต่ำและประเทศที่มีรายได้ต่ำอยู่ที่ 82% และ 80.3% ตามลำดับ^{[ 31 ]}

ประวัติศาสตร์

ในปี ค.ศ. 1901 คาร์ล แลนด์สไตเนอร์ได้ตีพิมพ์ผลการทดลองที่เขานำซีรั่มและเซลล์เม็ดเลือดแดงจากผู้บริจาค 5 คนมาผสมกัน เขาพบว่าซีรั่มของแต่ละคนจะไม่ทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงของตนเองจับตัวกัน แต่สามารถทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้อื่นจับตัวกันได้ และจากปฏิกิริยาการจับตัวกันนี้ เซลล์เม็ดเลือดแดงสามารถแบ่งออกเป็น 3 กลุ่ม ได้แก่ กลุ่ม A กลุ่ม B และกลุ่ม C กลุ่ม C ซึ่งประกอบด้วยเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ไม่ทำปฏิกิริยากับพลาสมาของบุคคลใด ๆ ต่อมาจะรู้จักกันในชื่อกลุ่ม O ^{[ 32 ]}^{: 5} กลุ่มที่สี่ ซึ่งปัจจุบันรู้จักกันในชื่อ AB ได้รับการอธิบายโดยเพื่อนร่วมงานของแลนด์สไตเนอร์ในปี ค.ศ. 1902 ^{[ 32 ]}^{: 7}การทดลองนี้เป็นตัวอย่างแรกของการจำแนกหมู่เลือด^{[ 1 ]}^{: 120}

ในปี พ.ศ. 2488 Robin Coombs , AE Mourant และRR Raceได้ตีพิมพ์คำอธิบายเกี่ยวกับการทดสอบแอนติโกลบูลิน (หรือที่รู้จักกันในชื่อการทดสอบ Coombs) งานวิจัยก่อนหน้านี้เกี่ยวกับแอนติบอดีหมู่เลือดได้บันทึกการมีอยู่ของแอนติบอดีที่เรียกว่า "แอนติบอดีปิดกั้น" หรือ "แอนติบอดีไม่สมบูรณ์": แอนติบอดีที่ครอบครองตำแหน่งแอนติเจน ป้องกันไม่ให้แอนติบอดีอื่นจับ แต่ไม่ทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงจับตัวกัน Coombs และเพื่อนร่วมงานของเขาได้คิดค้นวิธีการที่จะแสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของแอนติบอดีเหล่านี้ได้อย่างง่ายดาย พวกเขาฉีดอิมมูโนโกลบูลิน ของมนุษย์ เข้าไปในกระต่าย ซึ่งทำให้กระต่ายผลิต แอนติบอดี ต่อต้านโกลบูลินของมนุษย์ แอนติบอดีต่อต้านโกลบูลินของมนุษย์สามารถจับกับแอนติบอดีที่ติดอยู่กับเซลล์เม็ดเลือดแดงอยู่แล้วและทำให้เกิดการจับตัวกัน การคิดค้นการทดสอบแอนติโกลบูลินนำไปสู่การค้นพบแอนติเจนหมู่เลือดอีกมากมาย ในช่วงต้นทศวรรษ พ.ศ. 2493 บริษัทต่างๆ ได้เริ่มผลิตแอนติเซรัมเชิงพาณิชย์สำหรับการทดสอบแอนติเจนพิเศษ^{[ 32 ]}^{: 62–72}

หมายเหตุ

↑แอนติเจน RhD เป็นที่รู้จักกันทั่วไปในชื่อ "ปัจจัย Rh" แม้ว่าจะมีแอนติเจนอื่นๆ อีกหลายชนิดในระบบแอนติเจน Rhก็ตาม^{[ 1 ]}^{: 150}^{[ 2 ]}^{: 26}
↑นอกจาก C/c, E/e, Duffy, Kidd และ MNS แล้ว ผลกระทบจากขนาดยาที่มีนัยสำคัญทางคลินิกนั้นพบได้ยาก แต่ก็ไม่ใช่เรื่องที่เป็นไปไม่ได้สำหรับแอนติเจนอื่นๆ ดังนั้นจึงอาจพิจารณาแอนติเจนเหล่านั้นได้หากการตรวจหาความเข้ากันได้ของเนื้อเยื่อ ในภายหลัง ให้ผลเป็นบวก

[3] แอนติเจน RhD เป็นที่รู้จักกันทั่วไปในชื่อ "ปัจจัย Rh" แม้ว่าจะมีแอนติเจนอื่นๆ อีกหลายชนิดในระบบแอนติเจน Rhก็ตาม^{[ 1 ]}^{: 150}^{[ 2 ]}^{: 26}

[19] นอกจาก C/c, E/e, Duffy, Kidd และ MNS แล้ว ผลกระทบจากขนาดยาที่มีนัยสำคัญทางคลินิกนั้นพบได้ยาก แต่ก็ไม่ใช่เรื่องที่เป็นไปไม่ได้สำหรับแอนติเจนอื่นๆ ดังนั้นจึงอาจพิจารณาแอนติเจนเหล่านั้นได้หากการตรวจหาความเข้ากันได้ของเนื้อเยื่อ ในภายหลัง ให้ผลเป็นบวก

[หมายเหตุ 1 ]

[ 3 ]

[ 1 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 7 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

[ 13 ]

[ 14 ]

[ 15 ]

[ 16 ]

[ 17 ]

[หมายเหตุ 2 ]

[ 18 ]

[ 19 ]

[ 20 ]

[ 21 ]

[ 22 ]

[ 23 ]

[ 24 ]

[ 25 ]

[ 26 ]

[ 27 ]

[ 28 ]

[ 29 ]

[ 30 ]

[ 31 ]

[ 32 ]

[ 2 ]