กล้องจุลทรรศน์แบบกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัว ( TPEFหรือ2PEF ) เป็น เทคนิคการถ่ายภาพ ด้วยแสงฟลูออเรสเซนต์ที่เหมาะสมอย่างยิ่งสำหรับการถ่ายภาพเนื้อเยื่อที่มีชีวิตซึ่งมีการกระเจิงแสงและมีความหนาได้ถึงประมาณหนึ่งมิลลิเมตร แตกต่างจากกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ แบบดั้งเดิม ที่ความยาวคลื่นของการกระตุ้นสั้นกว่าความยาวคลื่นของการปล่อยแสงการกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัวต้องใช้การกระตุ้นพร้อมกันโดยโฟตอนสองตัวที่มีความยาวคลื่นยาวกว่าแสงที่ปล่อยออกมา เลเซอร์จะถูกโฟกัสไปยังตำแหน่งเฉพาะในเนื้อเยื่อและสแกนไปทั่วตัวอย่างเพื่อสร้างภาพตามลำดับ เนื่องจากความไม่เป็นเชิงเส้นของการกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัว ส่วนใหญ่แล้วฟลูออโรฟอร์ที่อยู่ในจุดโฟกัสขนาดไมโครเมตรของลำแสงเลเซอร์จะถูกกระตุ้น ซึ่งส่งผลให้เกิดความละเอียดเชิงพื้นที่ของภาพ ซึ่งแตกต่างจากกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลที่ความละเอียดเชิงพื้นที่เกิดจากการปฏิสัมพันธ์ของจุดโฟกัสการกระตุ้นและการตรวจจับแบบจำกัดด้วยรูเข็ม

กล้องจุลทรรศน์แบบกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัวโดยทั่วไปจะใช้ แสงกระตุ้น อินฟราเรดใกล้ (NIR) ซึ่งสามารถกระตุ้นสีย้อมเรืองแสง ได้เช่นกัน การใช้แสงอินฟราเรดช่วยลดการกระเจิงในเนื้อเยื่อ เนื่องจากแสงอินฟราเรดกระเจิงน้อยกว่าในเนื้อเยื่อทางชีวภาพทั่วไป เนื่องจากการดูดซับแบบหลายโฟตอน สัญญาณพื้นหลังจึงถูกระงับอย่างมาก ผลกระทบทั้งสองนี้ทำให้เทคนิคนี้มีความลึกในการทะลุทะลวง เพิ่มขึ้น การกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัวอาจเป็นทางเลือกที่ดีกว่ากล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลเนื่องจากมีความลึกในการทะลุทะลวงเนื้อเยื่อมากกว่า การตรวจจับแสงที่มีประสิทธิภาพ และการลดการซีดจางของแสง^{[ 2 ] [ 3 ]}

การกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัวใช้การดูดกลืนโฟตอนสองตัวซึ่งเป็นแนวคิดที่อธิบายครั้งแรกโดยMaria Goeppert Mayer (1906–1972) ในวิทยานิพนธ์ปริญญาเอกของเธอในปี 1931 ^{[ 4 ]}และสังเกตครั้งแรกในปี 1961 ในผลึก CaF ₂ :Eu ²⁺โดยใช้ การกระตุ้น ด้วยเลเซอร์โดยWolfgang Kaiser [ ^{5 ] Isaac} Abellaแสดงให้เห็นในปี 1962 ใน ไอ ซีเซียมว่าการกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัวของอะตอมเดี่ยวเป็นไปได้^{[ 6 ]}

กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัวมีความคล้ายคลึงกับเทคนิคกล้องจุลทรรศน์เลเซอร์แบบคอนโฟคอลอื่นๆ เช่นกล้องจุลทรรศน์เลเซอร์สแกนแบบคอนโฟ คอล และกล้องจุลทรรศน์รามานเทคนิคเหล่านี้ใช้ลำแสงเลเซอร์ที่โฟกัสแล้วสแกนเป็นรูปแบบแรสเตอร์เพื่อสร้างภาพ และทั้งสองเทคนิคมี ผล ในการตัดภาพทางแสงแต่ต่างจากกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอล กล้องจุลทรรศน์แบบมัลติโฟตอนไม่มีรูรับแสงแบบรูเข็มที่ทำให้กล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลมีคุณภาพในการตัดภาพทางแสง การตัดภาพทางแสงที่เกิดขึ้นจากกล้องจุลทรรศน์แบบมัลติโฟตอนเป็นผลมาจากฟังก์ชันการกระจายจุดของการกระตุ้น

แนวคิดของการกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัวนั้นอยู่บนพื้นฐานของความคิดที่ว่า โฟตอนสองตัวที่มีพลังงานต่ำกว่าที่จำเป็นสำหรับการกระตุ้นด้วยโฟตอนหนึ่งตัว สามารถกระตุ้นสารเรืองแสงได้ในเหตุการณ์ควอนตัมเดียว โฟตอนแต่ละตัวมีพลังงานประมาณครึ่งหนึ่งของพลังงานที่จำเป็นในการกระตุ้นโมเลกุล โฟตอนที่ปล่อยออกมามีพลังงานสูงกว่า (ความยาวคลื่นสั้นกว่า) โฟตอนกระตุ้นทั้งสองตัว ความน่าจะเป็นของการดูดซับโฟตอนสองตัวเกือบพร้อมกันนั้นต่ำมาก ดังนั้น โดย ทั่วไปจึงต้องใช้ ฟลักซ์ สูงสุด ของโฟตอนกระตุ้นสูง ซึ่งมักสร้างขึ้นโดยเลเซอร์พัลส์เฟม โตวินาที ตัวอย่างเช่น กำลังเลเซอร์เฉลี่ยเท่ากันแต่ไม่มีการปล่อยพัลส์ จะไม่เกิดการเรืองแสงที่ตรวจจับได้เมื่อเทียบกับการเรืองแสงที่สร้างขึ้นโดยเลเซอร์พัลส์ผ่านผลของโฟตอนสองตัว

เลเซอร์กระตุ้นที่มีความยาวคลื่นยาวกว่าและพลังงานต่ำกว่า (โดยทั่วไปคืออินฟราเรด) ที่ใช้ในกล้องจุลทรรศน์แบบมัลติโฟตอน เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการใช้ในการถ่ายภาพเซลล์ที่มีชีวิต เนื่องจากก่อให้เกิดความเสียหายต่อเซลล์น้อยกว่าเลเซอร์ที่มีความยาวคลื่นสั้นซึ่งมักใช้สำหรับการกระตุ้นแบบซิงเกิลโฟตอน ดังนั้นจึงสามารถสังเกตเนื้อเยื่อที่มีชีวิตได้นานขึ้นโดยมีผลกระทบที่เป็นพิษน้อยลง

ฟลูออโรฟอร์ที่ใช้กันทั่วไปส่วนใหญ่มีสเปกตรัมการกระตุ้นอยู่ในช่วง 400–500 นาโนเมตร ในขณะที่เลเซอร์ที่ใช้ในการกระตุ้นการเรืองแสงแบบสองโฟตอนนั้นอยู่ในช่วงประมาณ 700–1100 นาโนเมตร (อินฟราเรด) ซึ่งผลิตโดยเลเซอร์ Ti-sapphireหากฟลูออโรฟอร์ดูดซับโฟตอนอินฟราเรดสองตัวพร้อมกัน มันจะดูดซับพลังงานมากพอที่จะถูกกระตุ้น จากนั้นฟลูออโรฟอร์จะปล่อยโฟตอนเดี่ยวออกมาโดยมีความยาวคลื่นที่ขึ้นอยู่กับชนิดของฟลูออโรฟอร์ที่ใช้ (โดยทั่วไปอยู่ในช่วงสเปกตรัมที่มองเห็นได้ ) เนื่องจากมีการดูดซับโฟตอนสองตัวในระหว่างการกระตุ้นฟลูออโรฟอร์ ความน่าจะเป็นของการปล่อยแสงเรืองแสงจากฟลูออโรฟอร์จึงเพิ่มขึ้นเป็นกำลังสองตามความเข้มของการกระตุ้น ดังนั้นจึงมีการสร้างการเรืองแสงแบบสองโฟตอนมากขึ้นในบริเวณที่ลำแสงเลเซอร์โฟกัสอย่างแน่นหนามากกว่าบริเวณที่กระจายตัวมากกว่า โดยหลักการแล้ว การกระตุ้นจะจำกัดอยู่เฉพาะในปริมาตรโฟกัสขนาดเล็ก (~1 เฟมโตลิตร) ส่งผลให้สามารถกำจัดวัตถุที่อยู่นอกโฟกัสได้อย่างมีประสิทธิภาพสูงการจำกัดการกระตุ้น นี้ เป็นข้อได้เปรียบที่สำคัญเมื่อเทียบกับ กล้องจุลทรรศน์แบบกระตุ้น ด้วยโฟตอนเดี่ยวซึ่งจำเป็นต้องใช้ส่วนประกอบต่างๆ เช่น รูเข็ม เพื่อกำจัดแสงฟลูออเรสเซนต์ที่อยู่นอกโฟกัส จากนั้นแสงฟลูออเรสเซนต์จากตัวอย่างจะถูกรวบรวมโดยตัวตรวจจับที่มีความไวสูง เช่น หลอด โฟโตมัลติพลายเออร์ความเข้มของแสงที่สังเกตได้นี้จะกลายเป็นหนึ่งพิกเซลในภาพสุดท้าย จุดโฟกัสจะถูกสแกนไปทั่วบริเวณที่ต้องการของตัวอย่างเพื่อสร้างพิกเซลทั้งหมดของภาพ

กล้องจุลทรรศน์แบบสองโฟตอนได้รับการบุกเบิกและจดสิทธิบัตรโดยWinfried Denkและ James Strickler ในห้องปฏิบัติการของWatt W. Webbที่มหาวิทยาลัย Cornellในปี 1990 พวกเขารวมแนวคิดของการดูดซับสองโฟตอนเข้ากับการใช้สแกนเนอร์เลเซอร์^{[ 2 ] [ 7 ]}ในกล้องจุลทรรศน์แบบกระตุ้นด้วยสองโฟตอน ลำแสงเลเซอร์อินฟราเรดจะถูกโฟกัสผ่านเลนส์วัตถุเลเซอร์ Ti-sapphire ที่ใช้โดยทั่วไปมีความกว้างพัลส์ประมาณ 100 เฟมโตวินาที (fs) และอัตราการทำซ้ำประมาณ 80  MHzทำให้มีความหนาแน่นและฟลักซ์ของโฟตอนสูงที่จำเป็นสำหรับการดูดซับสองโฟตอน และสามารถปรับความยาวคลื่นได้ในช่วงกว้าง

การใช้แสงอินฟราเรดเพื่อกระตุ้นฟลูออโรฟอร์ใน เนื้อเยื่อ ที่กระจายแสงมีประโยชน์เพิ่มเติม^{[ 8 ]}คลื่นความยาวที่ยาวกว่าจะกระจายตัวน้อยกว่าคลื่นความยาวที่สั้นกว่า ซึ่งเป็นประโยชน์ต่อการสร้างภาพที่มีความละเอียดสูง นอกจากนี้ โฟตอนพลังงานต่ำเหล่านี้มีโอกาสน้อยที่จะก่อให้เกิดความเสียหายภายนอกปริมาตรโฟกัส เมื่อเทียบกับกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอล การตรวจจับโฟตอนมีประสิทธิภาพมากกว่ามาก เนื่องจากแม้แต่โฟตอนที่กระจายตัวก็ยังมีส่วนช่วยในสัญญาณที่ใช้งานได้ ประโยชน์เหล่านี้สำหรับการสร้างภาพในเนื้อเยื่อที่กระจายแสงได้รับการยอมรับเพียงไม่กี่ปีหลังจากที่คิดค้นกล้องจุลทรรศน์แบบกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัว^{[ 9 ]}

การใช้กล้องจุลทรรศน์แบบสองโฟตอนมีข้อจำกัดหลายประการ ได้แก่ เลเซอร์แบบพัลส์ที่จำเป็นสำหรับการกระตุ้นแบบสองโฟตอนมีราคาแพงกว่าเลเซอร์แบบคลื่นต่อเนื่อง (CW) ที่ใช้ในกล้องจุลทรรศน์แบบคอนโฟคอลมาก สเปกตรัมการดูดกลืนแสงแบบสองโฟตอนของโมเลกุลอาจแตกต่างจากสเปกตรัมการดูดกลืนแสงแบบหนึ่งโฟตอนอย่างมาก ความเสียหายจากแสงในลำดับที่สูงขึ้นกลายเป็นปัญหา และการฟอกสีจะแปรผันตามกำลังสองของกำลังเลเซอร์ ในขณะที่สำหรับแบบโฟตอนเดียว (คอนโฟคอล) จะเป็นเชิงเส้น สำหรับวัตถุที่บางมาก เช่น เซลล์เดี่ยว กล้องจุลทรรศน์แบบโฟตอนเดียว (คอนโฟคอล) สามารถสร้างภาพที่มีความละเอียดเชิงแสง สูงกว่า เนื่องจากความยาวคลื่นการกระตุ้นที่สั้นกว่า ในทางกลับกัน ในเนื้อเยื่อที่มีการกระเจิงแสง ความสามารถในการตัดภาพและการตรวจจับแสงที่เหนือกว่าของกล้องจุลทรรศน์แบบสองโฟตอนส่งผลให้ประสิทธิภาพดีกว่า

กล้องจุลทรรศน์แบบสองโฟตอนมีส่วนเกี่ยวข้องในหลายสาขา ได้แก่ สรีรวิทยา ประสาทชีววิทยา วิทยาเอ็มบริโอ และวิศวกรรมเนื้อเยื่อแม้แต่เนื้อเยื่อที่บางและเกือบโปร่งใส (เช่น เซลล์ผิวหนัง) ก็สามารถมองเห็นได้อย่างชัดเจนด้วยรายละเอียดด้วยเทคนิคนี้^{[ 10 ]}ความสามารถในการถ่ายภาพความเร็วสูงของกล้องจุลทรรศน์แบบสองโฟตอนยังสามารถนำไปใช้ในการตรวจชิ้นเนื้อด้วยแสงแบบไม่รุกรานได้อีกด้วย^{[ 11 ]}กล้องจุลทรรศน์แบบสองโฟตอนถูกนำมาใช้อย่างเหมาะสมในการสร้างปฏิกิริยาเคมีเฉพาะที่^{[ 9 ]}ซึ่งเป็นผลที่ถูกนำมาใช้สำหรับการพิมพ์หินแบบสองโฟตอน ด้วยเช่นกัน การใช้กล้องจุลทรรศน์แบบเรืองแสงสองโฟตอนและการสร้างฮาร์มอนิกที่สองแสดงให้เห็นว่า โมเลกุลประเภท พอร์ไฟริน อินทรีย์ สามารถมีโมเมนต์ไดโพลการเปลี่ยนผ่าน ที่แตกต่างกัน สำหรับการเรืองแสงสองโฟตอนและการสร้างฮาร์มอนิกที่สอง^{[ 12 ]}ซึ่งโดยทั่วไปแล้วคิดว่าเกิดขึ้นจากโมเมนต์ไดโพลการเปลี่ยนผ่านเดียวกัน^{[ 13 ]}การกระตุ้นด้วยโฟตอนสองตัวที่ไม่เสื่อมสภาพ หรือการใช้โฟตอน 2 ตัวที่มีความยาวคลื่นไม่เท่ากัน แสดงให้เห็นว่าทำให้การเรืองแสงของโมเลกุลขนาดเล็กและโปรตีนเรืองแสงที่ทดสอบทั้งหมดเพิ่มขึ้น^{[ 14 ]}

2PEF ได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประโยชน์อย่างมากในการระบุลักษณะของมะเร็งผิวหนัง [ ^{15 ] นอกจาก นี้}ยังแสดงให้เห็นว่าสามารถเปิดเผยการหยุดชะงักของเซลล์เนื้องอก ปฏิสัมพันธ์ระหว่างเซลล์เนื้องอกกับเกล็ดเลือด ปฏิสัมพันธ์ระหว่างเซลล์เนื้องอกกับเม็ดเลือดขาว และกระบวนการแพร่กระจายของมะเร็ง^{[ 16 ]}

2PEF แสดงให้เห็นว่ามีข้อได้เปรียบเหนือเทคนิคอื่นๆ เช่นกล้องจุลทรรศน์คอนโฟคอลเมื่อพูดถึงการถ่ายภาพเซลล์มีชีวิตในระยะยาวของตัวอ่อนสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม^{[ 17 ]}

2PEF ยังถูกนำมาใช้ในการแสดงภาพเซลล์ประเภทที่เข้าถึงได้ยาก โดยเฉพาะอย่างยิ่งเซลล์ไต^{[ 18 ]}มีการนำมาใช้เพื่อทำความเข้าใจพลศาสตร์ของไหลและการกรองให้ดียิ่งขึ้น^{[ 19 ]}

2PEF ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเป็นเครื่องมือที่มีค่าสำหรับการตรวจสอบความสัมพันธ์ของการติดเชื้อไวรัส ( SARS-CoV-2 ) ในการเพาะเลี้ยงเซลล์โดยใช้ สีย้อมที่ไวต่อ Ca ²⁺ที่ทำงานด้วย 2P ^{[ 20 ]}

2PEF รวมถึงการขยายวิธีการนี้ไปยัง3PEFถูกนำมาใช้เพื่อจำแนกลักษณะของเนื้อเยื่อประสาทที่สมบูรณ์ในสมองของสัตว์ที่มีชีวิตและแม้กระทั่งสัตว์ที่กำลังแสดงพฤติกรรม โดยเฉพาะอย่างยิ่ง วิธีนี้มีข้อดีสำหรับการสร้างภาพแคลเซียมของเซลล์ประสาทหรือกลุ่มเซลล์ประสาท^{[ 21 ]}สำหรับเภสัชวิทยาแสงรวมถึงการปลดปล่อยส่วนประกอบเฉพาะที่ เช่น กลูตาเมต^{[ 22 ]} GABA ^{[ 23 ]}หรือไอโซเมอไรเซชันของยาที่สามารถเปลี่ยนสถานะด้วยแสง^{[ 24 ] [ 25 ]}และสำหรับการสร้างภาพของเซนเซอร์ที่เข้ารหัสทางพันธุกรรมอื่นๆ ที่รายงานความเข้มข้นของสารสื่อประสาท^{[ 26 ]}

ปัจจุบันกล้องจุลทรรศน์แบบสองโฟตอนถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการถ่ายภาพการทำงานของเซลล์ประสาทในสิ่งมีชีวิตจำลอง เช่น แมลงวันผลไม้ ( Drosophila melanogaster ) หนูนกขับขาน ลิงเฟอร์เร็ตหนู ( Mus musculus )และ ปลา ซีบราฟิช [ ^{27 ] [ 28 ] [ 29 ] โดย}ทั่วไปแล้ว สัตว์เหล่านี้จะถูกตรึงหัวไว้เนื่องจากขนาดของกล้องจุลทรรศน์และอุปกรณ์สแกน แต่ก็มีการพัฒนากล้องจุลทรรศน์ขนาดเล็กที่ช่วยให้สามารถถ่ายภาพเซลล์ประสาทในสัตว์ที่เคลื่อนไหวและมีพฤติกรรมอิสระได้เช่นกัน^{[ 30 ] [ 31 ]}

การดูดซับโฟตอนสามตัวหรือมากกว่าพร้อมกันก็เป็นไปได้เช่นกัน ทำให้สามารถใช้กล้องจุลทรรศน์แบบกระตุ้นด้วยโฟตอนหลายตัวที่มีลำดับสูงกว่าได้^{[ 32 ]}เทคนิคที่เรียกว่า "กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงแบบกระตุ้นด้วยโฟตอนสามตัว" (3PEF) เป็นเทคนิคที่ใช้กันมากที่สุดรองจาก 2PEF ซึ่งเป็นเทคนิคเสริมกัน นอกจากนี้ยังมีการรายงานเกี่ยวกับการเกิดไอโซเมอไรเซชันเฉพาะที่ของยาที่สามารถเปลี่ยนสถานะด้วยแสงในร่างกายโดยใช้การกระตุ้นด้วยโฟตอนสามตัว^{[ 33 ]}

โดยทั่วไปโปรตีนเรืองแสง (CFP, GFP, YFP, RFP) และสีย้อมที่ใช้กันทั่วไปทั้งหมดสามารถถูกกระตุ้นได้ในโหมดสองโฟตอน สเปกตรัมการกระตุ้นด้วยสองโฟตอนมักจะกว้างกว่ามาก ทำให้การกระตุ้นฟลูออโรฟอร์อย่างเลือกสรรโดยการสลับความยาวคลื่นการกระตุ้นทำได้ยากขึ้น

มีการรายงานสีย้อมที่ปล่อยแสงสีเขียว สีแดง และ NIR หลายชนิด (โพรบและฉลากปฏิกิริยา) ที่มีค่าภาคตัดขวางการดูดซับ 2 โฟตอนสูงมาก^{[ 34 ]}เนื่องจากโครงสร้างแบบผู้ให้-ผู้รับ-ผู้ให้สีย้อมสควาเรนเช่นSeta-670 , Seta-700และSeta-660แสดงประสิทธิภาพการดูดซับ 2 โฟตอน (2PA) ที่สูงมากเมื่อเทียบกับสีย้อมอื่นๆ^{[ 34 ] [ 35 ] [ 36 ]} SeTau-647และSeTau-665 ซึ่งเป็นสควาเรน- โรแทกเซนชนิดใหม่แสดงค่าภาคตัดขวางการกระทำสองโฟตอนที่สูงมากถึง 10,000 GM ในบริเวณอินฟราเรดใกล้ ซึ่งไม่มีสีย้อมอินทรีย์ประเภทอื่นใดเทียบได้^{[ 34 ]}

• การจัดเก็บข้อมูลเชิงแสง 3 มิติ
• ทัศนศาสตร์แบบไม่เชิงเส้น
• กล้องจุลทรรศน์ภาพฮาร์มอนิกที่สอง
• กล้องจุลทรรศน์สามโฟตอน
• การดูดกลืนโฟตอนสองตัว
• สเปกโทรสโกปีโฟโตอิเล็กตรอนสองโฟตอน
• กล้องจุลทรรศน์มัลติโฟตอนแบบมุมกว้าง

• ชมิตต์, ไมเคิล; มาเยอร์โฮเฟอร์, โธมัส; ป็อปป์, เจอร์เก้น; เคล็ปเป้, อินโก; ไวส์ชาร์ต, เคลาส์ (2013) "ปฏิสัมพันธ์ระหว่างแสงและสสาร" คู่มือไบโอโฟโตนิกส์ . ดอย : 10.1002/9783527643981.bphot003 . ไอเอสบีเอ็น 978-3-527-64398-1. S2CID  93908151 .
• König, Karsten (2018). กล้องจุลทรรศน์มัลติโฟตอนและการถ่ายภาพอายุการเรืองแสง: การประยุกต์ใช้ในชีววิทยาและการแพทย์ Walter de Gruyter GmbH & Co KG. ISBN 978-3-11-042998-5.
• เกอิโคสราวี, อดิบ; เบรดเฟลด์, เจเรมี เอส.; ซาการ์, อับดุล คาเดอร์; เอลิเซรี, เควิน ดับเบิลยู. (2014) "การถ่ายภาพมะเร็งด้วยฮาร์โมนิกรุ่นที่สอง" การถ่ายภาพเชิงปริมาณทางชีววิทยาของเซลล์ . วิธีการทางชีววิทยาของเซลล์ ฉบับที่ 123. หน้า  531– 546. ดอย : 10.1016/B978-0-12-420138-5.00028-8 . ไอเอสบีเอ็น 978-0-12-420138-5. PMID  24974046 .
• Yu, Hanry; Rahim, Nur Aida Abdul (2013). การถ่ายภาพในวิศวกรรมเซลล์และเนื้อเยื่อ . สำนักพิมพ์ CRC. ISBN 978-1-4398-4804-3.

• การทำให้กล้องจุลทรรศน์แบบสองโฟตอนง่ายขึ้น
• สัมมนาออนไลน์: การติดตั้งกล้องจุลทรรศน์ 2 โฟตอนแบบง่ายและประหยัดค่าใช้จ่าย
• สีย้อมที่เหมาะสมสำหรับโฟตอนสองตัว
• บทนำสู่กล้องจุลทรรศน์มัลติโฟตอน
• การได้มาซึ่งภาพแบบเรียลไทม์หลายภาพสำหรับกล้องจุลทรรศน์แบบสแกนด้วยเลเซอร์ (บทความเกี่ยวกับกล้องจุลทรรศน์ของแซนเดอร์สัน)
• สร้างกล้องจุลทรรศน์ 2 โฟตอนอัตราการบันทึกวิดีโอของคุณเอง
• กล้องจุลทรรศน์แสงฟลูออเรสเซนต์สองโฟตอน, สารานุกรมวิทยาศาสตร์ชีวภาพ
• "กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบมัลติโฟตอน"คู่มือเบื้องต้นเกี่ยวกับกล้องจุลทรรศน์มหาวิทยาลัยรัฐฟลอริดาสืบค้นเมื่อ 3 มีนาคม2018
• กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์แบบกระตุ้นด้วยโฟตอนหลายตัวมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน
• หลักการพื้นฐานและการประยุกต์ใช้ในกล้องจุลทรรศน์แบบกระตุ้นด้วยโฟตอนหลายตัว Nikon MicroscopyU
• "ภาคตัดขวางของการกระทำของโฟตอนสองตัว "
• ฐานข้อมูลสเปกตรัมการดูดกลืนโฟตอนสองตัว ( 2PA ) KBFI