ไมโรซิเนส
ไมโรซิเนส ( EC 3.2.1.147 , ไทโอไกลโคไซด์ กลูโคไฮโดรเลส , ซินิกริเนสและซินิกเรส ) เป็นกลุ่มเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันพืชจากสัตว์กินพืชโดยเฉพาะอย่างยิ่งระเบิดน้ำมันมัสตาร์ดโครงสร้างสามมิติได้รับการศึกษาและมีอยู่ในฐานข้อมูล PDB (ดูลิงก์ในกล่องข้อมูล)
ไมโรซิเนส ซึ่ง เป็นสมาชิกของ ตระกูล ไกลโคไซด์ไฮโดรเลสมีความคล้ายคลึงกับโอ- ไกลโคซิเดสที่ พบได้ทั่วไปหลายประการ [ 2 ] [ 3 ]อย่างไรก็ตาม ไมโรซิเนสเป็นเอนไซม์ เพียงชนิดเดียว ที่พบในธรรมชาติที่สามารถแยกกลูโคสที่เชื่อมต่อด้วยไทโอได้หน้าที่ทางชีวภาพที่ทราบของมันคือการเร่งปฏิกิริยาไฮโดรไลซิสของสารประกอบประเภทหนึ่งที่เรียกว่ากลูโคซิโนเลต[ 4 ]
กิจกรรมไมโรซิเนส
ไมโรซิเนสถือเป็นเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันและสามารถไฮโดรไลซ์กลูโคซิโนเลตเป็นสารประกอบต่างๆ ซึ่งบางชนิดเป็นพิษ[ 5 ]
กลไก
ไมโรซิเนสเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาทางเคมี
- ไทโอกลูโคไซ ด์+ น้ำตาล + ไทออล
ดังนั้นสารตั้งต้น สองชนิด ของเอนไซม์นี้คือไทโอไกลโคไซด์และH₂O ในขณะที่ ผลิตภัณฑ์สองชนิดของ นี้ คือน้ำตาลและไทออล
เมื่อมีน้ำ อยู่ ไมโรซิเนสจะแยก กลุ่ม กลูโคส ออก จากกลูโคซิโนเลต โมเลกุลที่เหลือจะเปลี่ยนอย่างรวดเร็วเป็นไทโอไซยาเนตไอโซไทโอไซยา เนต หรือไนไตรล์ซึ่งเป็นสารออกฤทธิ์ที่ทำหน้าที่ป้องกันพืช การไฮโดรไลซิสของกลูโคซิโนเลตโดยไมโรซิเนสสามารถให้ผลิตภัณฑ์ได้หลากหลาย ขึ้นอยู่กับสภาวะทางสรีรวิทยาต่างๆ เช่นpHและการมีอยู่ของโคแฟคเตอร์ บางชนิด ปฏิกิริยาที่ทราบทั้งหมดมีขั้นตอนเริ่มต้นเหมือนกัน(ดูรูปที่ 2)ขั้นแรก พันธะ β-ไทโอกลูโคไซด์จะถูกแยกออกโดยไมโรซิเนส ปล่อยD-กลูโคส ออกมา อะไกลโคนที่ได้จะเกิดการจัดเรียงตัวใหม่ แบบ Lossen โดยธรรมชาติ ปล่อยซัลเฟต ออกมา ขั้นตอนสุดท้ายในกลไก มีความหลากหลายมากที่สุด ขึ้นอยู่กับสภาวะทางสรีรวิทยาที่ปฏิกิริยาเกิดขึ้น ที่ pHเป็นกลางผลิตภัณฑ์หลักคือไอโซไทโอไซยาเนต ภายใต้สภาวะที่เป็นกรด (pH < 3) และเมื่อมีไอออนเหล็ก หรือโปรตีนเอพิไทโอสเปซิเฟอร์อยู่ การก่อตัวของไนไตรล์จะเกิดขึ้นได้ง่ายกว่า[ 2 ] [ 6 ]

โคแฟคเตอร์และสารยับยั้ง
แอสคอร์เบตเป็นโคแฟคเตอร์ ที่รู้จักกันดี ของไมโรซิเนส ทำหน้าที่เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาเบส ในการ ไฮโดรไล ซิส ของ กลูโค ซิโนเลต [ 1 ] [ 7 ] ตัวอย่างเช่น ไมโรซิเนสที่แยกได้จากไชเท้า ( Raphanus sativus ) แสดงให้เห็นว่า Vmaxเพิ่มขึ้นจาก 2.06 μmol/min ต่อ mg ของโปรตีนเป็น 280 μmol/min ต่อ mg ของโปรตีนบนสารตั้งต้นอัลลิลกลูโคซิโนเลต (ซินิกริิน) เมื่อมีแอสคอร์เบต 500 μM [ 4 ]ซัลเฟต ซึ่งเป็นผลพลอยได้จาก การไฮโดรไลซิสของ กลูโค ซิโนเลต ได้รับการระบุว่าเป็นตัวยับยั้งแบบแข่งขันของไมโรซิเนส[ 4 ]นอกจากนี้ 2-F-2-ดีออกซีเบนซิลกลูโคซิโนเลต ซึ่งถูกสังเคราะห์ขึ้นโดยเฉพาะเพื่อศึกษาถึงกลไกของไมโรซิเนส จะยับยั้งเอนไซม์โดยการดักจับกรดกลูตามิก ตัวใดตัวหนึ่ง ในบริเวณออกฤทธิ์ Glu409 [ 3 ] [ 8 ]
โครงสร้าง
ไมโรซิเนสมีอยู่เป็นไดเมอร์ที่มีซับยูนิตขนาด 60-70 kDaต่อซับ ยูนิต [ 9 ] [ 10 ]การวิเคราะห์โครงสร้างผลึกด้วยรังสีเอกซ์ ของไมโรซิเน สที่แยกได้จากSinapis albaเผยให้เห็นว่าซับยูนิตทั้งสองเชื่อมต่อกันด้วยอะตอมสังกะสี[ 7 ] เชื่อกันว่า การมีพันธะเกลือ พันธะไดซัลไฟด์พันธะไฮโดรเจนและไกลโคซิเลชัน จำนวนมาก มีส่วนช่วยให้เอนไซม์มีความเสถียร โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อพืชถูกโจมตีและประสบกับความเสียหายของเนื้อเยื่ออย่างรุนแรง[ 2 ]คุณลักษณะของ β- กลูโคซิเดส หลายชนิดคือ มีหมู่กลูตา เมตที่เป็นตัว เร่งปฏิกิริยาอยู่ที่ตำแหน่งออกฤทธิ์ แต่ ในไมโรซิเนสมีหมู่กลูตาเม ต สองหมู่ถูกแทนที่ด้วยหมู่กลูตามีนเพียงหมู่เดียว[ 3 ] [ 11 ]พบว่าแอสคอร์เบตสามารถทดแทนการทำงานของหมู่กลูตาเมตได้[ 1 ] (ดูรูปที่ 3 สำหรับกลไก)

หน้าที่ทางชีวภาพ
ไมโรซิเนสและสารตั้งต้นตาม ธรรมชาติของมัน คือกลูโคซิโนเลตเป็นที่ทราบกันว่าเป็นส่วนหนึ่งของการตอบสนองการป้องกันของพืชเมื่อพืชถูกโจมตีโดยเชื้อโรคแมลงหรือสัตว์กินพืช อื่นๆ พืชจะใช้ไมโรซิเนสในการเปลี่ยนกลูโคซิโนเลตซึ่งโดยปกติแล้วไม่เป็นอันตราย ให้กลายเป็นผลิตภัณฑ์ที่เป็นพิษ เช่นไอโซไทโอไซ ยาเนต ไท โอไซยา เนต และไนไตรล์[ 2 ]
การแบ่งส่วนในพืช
ระบบป้องกันก ลูโคซิโนเลต-ไมโรซิเนสถูกบรรจุอยู่ในพืชในลักษณะเฉพาะ พืชเก็บกลูโคซิโนเลต ของไมโรซิเน สโดยการแบ่งส่วน ทำให้กลูโคซิโนเลตถูกปล่อยออกมาและทำงานก็ต่อเมื่อพืชถูกโจมตีเท่านั้น ไมโรซิเนสส่วนใหญ่ถูกเก็บไว้ในรูปของเม็ดไมโรซินในแวคิวโอ ลของ ไอดีโอบลาสต์เฉพาะที่เรียกว่าเซลล์ไมโรซิน แต่ก็มีรายงานว่าพบในโปรตีนบอดี้หรือแวคิวโอลและในรูปของเอนไซม์ไซโตโซลที่มักจะจับกับเยื่อหุ้มเซลล์ด้วย[ 12 ] [ 13 ]กลูโคซิโนเลตถูกเก็บไว้ใน "เซลล์ S" ที่อยู่ติดกันแต่แยกจากกัน [ 14 ]เมื่อพืชได้รับความเสียหายของเนื้อเยื่อ ไมโรซิเนสจะสัมผัสกับกลูโคซิโนเลตและกระตุ้นให้เกิดการทำงานอย่างรวดเร็วในรูปแบบที่มีฤทธิ์ต้านแบคทีเรีย[ 2 ]ผลิตภัณฑ์ที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดคือไอโซไทโอไซยาเนตตามด้วยไทโอไซยาเนตและไนไตรล์[ 15 ]
วิวัฒนาการ
พืชที่ทราบกันว่ามีวิวัฒนาการระบบป้องกันไมโรซิเนส-กลูโคซิโนเลต ได้แก่มัสตาร์ดขาว ( Sinapis alba ) [ 9 ]ผักกาดหอม ( Lepidium sativum ) [ 16 ]วาซาบิ ( Wasabia japonica ) [ 17 ]และหัวไชเท้า ( Raphanus sativus ) [ 18 ] [ 19 ] รวมถึงสมาชิกหลายชนิดในวงศ์Brassicaceaeได้แก่ มัสตาร์ดเหลือง ( Brassica juncea ) [ 20 ] เมล็ดเรพซีด ( Brassica napus ) [ 21 ]และผักตระกูลกะหล่ำที่นิยมรับประทาน เช่นบรอกโคลีกะหล่ำดอกกะหล่ำปลี ผักกาดขาวและคะน้า[ 2 ]รสขมติดลิ้นของผักเหล่านี้หลายชนิดมักเกิดจากการไฮโดรไลซิสของ กลูโคซิโนเลตเมื่อเนื้อเยื่อเสียหายระหว่างการเตรียมอาหารหรือเมื่อรับประทานผักเหล่านี้ดิบ[ 2 ]เมล็ดมะละกอใช้วิธีการป้องกันนี้ แต่เนื้อผลไม้เองไม่ได้ใช้[ 22 ]
ไมโรซิเนสยังถูกแยกได้จากเพลี้ยกะหล่ำปลีด้วย[ 23 ]ซึ่งบ่งชี้ถึงวิวัฒนาการร่วมกันของเพลี้ยกะหล่ำปลีกับแหล่งอาหารหลักของมัน เพลี้ยใช้กลยุทธ์การป้องกันที่คล้ายกับพืช เช่นเดียวกับแหล่งอาหารหลักของมัน เพลี้ยกะหล่ำปลีจะเก็บไมโรซิเนสและกลูโคซิโนเลตที่มันกินเข้าไปไว้ในช่อง เมื่อเพลี้ยกะหล่ำปลีถูกโจมตีและเนื้อเยื่อของมันได้รับความเสียหาย กลูโคซิโนเลตที่เก็บไว้จะถูกกระตุ้น ทำให้เกิดไอโซไทโอไซยาเนตและยับยั้งผู้ล่าไม่ให้โจมตีเพลี้ยตัวอื่น[ 24 ]
ความสำคัญทางประวัติศาสตร์และการประยุกต์ใช้ในยุคปัจจุบัน
เกษตรกรรม
ในอดีต พืชเช่นเรพซีดที่มีระบบกลูโคซิโนเลต-ไมโรซิเนสถูกคัดเลือกพันธุ์ โดยเจตนา เพื่อลดปริมาณกลูโคซิโนเลต เนื่องจากเรพซีดในอาหารสัตว์พิสูจน์แล้วว่าเป็นพิษต่อปศุสัตว์[ 25 ] ระบบกลูโคซิโนเลต-ไมโรซิเนสได้รับการศึกษาในฐานะสารรมควันชีวภาพที่อาจใช้ปกป้องพืชผลจากศัตรูพืช ผลิตภัณฑ์ไฮโดรไลซิสกลูโคซิโนเลตที่มีศักยภาพ (GHPs) สามารถฉีดพ่นลงบนพืชผลเพื่อยับยั้งการกินพืช อีกทางเลือกหนึ่งคือการใช้เทคนิคทางพันธุวิศวกรรมเพื่อนำระบบกลูโคซิโนเลต-ไมโรซิเนสเข้าสู่พืชผลเพื่อเสริมสร้างความต้านทานต่อศัตรูพืช[ 15 ]
ผลกระทบต่อสุขภาพ
ไอโซไทโอไซยาเนตซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์หลักของการไฮโดรไลซิสของกลูโคซิโนเลต เป็นที่ทราบกันดีว่าสามารถป้องกัน การดูดซึม ไอโอดีนในต่อมไทรอยด์ทำให้เกิดโรคคอพอกได้ [ 26 ] ไอโซไทโอไซยาเนตในความเข้มข้นสูงอาจทำให้เกิดพิษต่อตับได้ [ 4 ] ยังไม่มีหลักฐานทางวิทยาศาสตร์ที่เพียงพอว่าการบริโภคผักตระกูลกะหล่ำที่มีไอโซไทโอไซยาเนตเพิ่มขึ้นส่งผลต่อความเสี่ยงของโรคในมนุษย์หรือไม่[ 27 ]