ทางหลวงหมายเลข US 321 เป็นเส้นทางเชื่อมต่อโดยตรงระหว่างเมืองซาวานนาห์และโคลัมเบียเป็นทางเลือกแทนทางหลวงระหว่างรัฐหมายเลข 95และทางหลวงระหว่างรัฐหมายเลข 26เริ่มต้นจากเมืองฮาร์ดีวิลล์ ทางหลวง US 321 ส่วนใหญ่เป็นถนน 2 เลน ผ่านพื้นที่ที่มีประชากรเบาบางและเมืองเล็กๆ เช่นเอสตีลแฟร์แฟ็กซ์และเดนมาร์กมุ่งหน้าไปทางเหนือตรงไปยังพื้นที่โคลัมเบีย ขยายเป็นถนน 5 เลนหลังจาก เมือง นีเซสจากนั้นแคบลงเหลือ 2 เลนหลังจากเมืองนอร์ทและขยายเป็นถนน 5 เลนอีกครั้งหลังจาก เมือง สวอนซีและคงเป็นเช่นนั้นจนกระทั่งรวมกับเส้นทางหลักUS 21ในเมืองดิกเซียนา ในโคลัมเบีย เส้นทางจะวิ่งคู่ขนานกับ US 21 ผ่านเมืองเคย์ซีข้ามแม่น้ำคองการีบนสะพานบลอสซัมสตรีท เลี้ยวซ้ายเข้าสู่ถนนฮูเกอร์ เลี้ยวขวาเข้าสู่ถนนเอล์มวูด และเลี้ยวซ้ายเข้าสู่ถนนนอร์ทเมน ถนนจะแยกกันที่สวนสาธารณะไฮแอท โดย US 321 อยู่ทางตะวันตกของI-77และ US 21 อยู่ทางเหนือของโคลัมเบีย เส้นทางนี้จะผ่านชุมชนต่างๆ ได้แก่วินส์โบโรเชสเตอร์ยอร์กและโคลเวอร์ก่อนจะเข้าสู่รัฐนอร์ทแคโรไลนาที่เมืองโบว์ลิงกรีน

ทางหลวงหมายเลข US 321 เป็นเส้นทางสำคัญในรัฐนอร์ทแคโรไลนาตะวันตกเป็นเส้นทางเลือกจากเหนือจรดใต้ แทนที่ทางหลวงหมายเลข I-77ซึ่งผ่านเขตเมืองใหญ่ที่พลุกพล่าน และ ทางหลวง หมายเลข US 221ซึ่งเป็นเส้นทางคดเคี้ยวขึ้นไปตามเทือกเขาแอปปาเลเชียนนักเดินทางจากรัฐเซาท์แคโรไลนาที่ต้องการไปยังจุดต่างๆ ทางตะวันตกของเมืองชาร์ล็อตต์และต้องการหลีกเลี่ยงการจราจรติดขัดบนทางหลวงหมายเลข I-77 อาจเลือกใช้เส้นทาง US 321 เข้าสู่รัฐนอร์ท แคโรไลนา

ทางหลวงสายนี้ตัดผ่านเจ็ดเทศมณฑล ได้แก่แกสตันลินคอล์นคาตาบาเบิร์กคัลด์เวล ล์ วาตาอูกาและเอเวอรี่ ทางหลวงหมายเลข US 321 มีเมืองควบคุมหกเมือง ได้แก่แกสตันเนียลินคอล์นตันฮิคกอรี เลอนัว ร์โบลวิงร็อกและบูเน

ทางหลวงหมายเลข 321 ของสหรัฐอเมริกาเป็นทางหลวงหลายเลน เริ่มต้นที่เส้นแบ่งเขตแดนของรัฐ หลังจาก7 ไมล์ (11 กม.)ก็จะเข้าสู่ พื้นที่ แกสตันเนียการจราจรบนทางหลวงหมายเลข 321 ที่มุ่งหน้าไปทางเหนือผ่านแกสตันเนียโดยทั่วไปจะไม่หนาแน่นเท่ากับการจราจรบนทางหลวงหมายเลข 321 ที่มุ่งหน้าไปทางใต้ทางเหนือของI-85ซึ่งอาจติดขัดเป็นระยะทางหลายไมล์ขณะที่ผู้ขับขี่รอเลี้ยวเข้าสู่ I-85 รัฐได้สร้างทางแยกต่างระดับใหม่กับ I-85 เสร็จสมบูรณ์ในปี 2021 ซึ่งทำให้ทางหลวงหมายเลข 321 ที่มุ่งหน้าไปทางใต้ตัดผ่านทางหลวงหมายเลข 321 ที่มุ่งหน้าไปทางเหนือที่สัญญาณไฟจราจรทางเหนือของ I-85 การจราจรในปัจจุบันเข้าสู่ I-85 ที่มุ่งหน้าไปทางเหนือด้วยทางลาดทางเข้าแบบลอดใต้ทางรถไฟเดิม^{[ 4 ]} 

ถนนจะกลายเป็นทางด่วนที่ C. Grier Beam Boulevard ในเมือง Gastonia ทางใต้ของNC 275 / NC 279 เล็กน้อย และยังคงเป็นทางด่วนไปจนถึงทางเหนือของจุดตัดกับUS 70ในเมือง Hickory ทางด่วนนี้เลี่ยงเมืองหลายแห่งที่เส้นทาง US 321 เดิมเคยผ่าน ปัจจุบัน US 321 Business ใช้เส้นทางเดิม38 ไมล์ (61 กิโลเมตร)ซึ่งให้บริการเมือง Maiden , NewtonและConoverแต่ทางด่วนเป็นเส้นทางที่ตรงกว่าไปยังภูเขา และเส้นทางธุรกิจโดยทั่วไปใช้เฉพาะการจราจรในท้องถิ่นเท่านั้น 

การจราจรมักจะหนาแน่นระหว่างHickoryและLenoirกรมการขนส่งแห่งรัฐนอร์ทแคโรไลนา (NCDOT) มีแผนระยะยาวที่จะขยายถนนเป็นหกเลน ซึ่งคาดว่าจะเริ่มดำเนินการหลังปี 2020 ^{[ 5 ]}

ทางเหนือของ Lenoir ทางหลวงหมายเลข US 321 เป็นทางหลวงสี่เลนแบบแบ่งช่องจราจร ซึ่งทอดยาวขึ้นไปตามหน้าผาสูงชันของเทือกเขา Blue Ridgeจนถึงต้นปี 2018 ถนนสายนี้เป็นทางหลวงสองเลนแคบๆ จากบริเวณใกล้Pattersonผ่านBlowing Rockงานก่อสร้างในบริเวณนี้ดำเนินต่อไปเป็นส่วนใหญ่ในช่วงสองทศวรรษแรกของศตวรรษที่ 21 การขยายทางหลวงหมายเลข US 321 ผ่าน Blowing Rock ถือเป็นโครงการที่มีข้อโต้แย้ง และยังคงเป็นเช่นนั้นมาจนถึงปัจจุบัน ผู้อยู่อาศัยในเมืองหลายคนรู้สึกว่าทางหลวงสี่เลนจะทำลายเอกลักษณ์ของเมืองเล็กๆ แห่งนี้ และพวกเขาได้เสนอทางเลือกทางเลี่ยงหลายทาง NCDOT เลือกการขยายถนนเป็นทางเลือกที่ต้องการ แต่ได้เพิ่มคุณสมบัติหลายอย่าง เช่น ระบบสาธารณูปโภคใต้ดิน ทางเท้า การจัดสวน และกำแพงหิน เพื่อทำให้การขยายถนนเป็นที่ยอมรับได้มากขึ้นสำหรับผู้อยู่อาศัยที่คัดค้าน^{[ 6 ]}คุณสมบัติเหล่านี้ไม่มีอยู่ในทางหลวงสองเลนที่ถูกแทนที่ ส่วนสุดท้ายของโครงการขยายถนน ซึ่งเป็นส่วนที่ลาดชันที่สุดของถนนทางใต้ของเมืองโบลวิงร็อก เริ่มขึ้นในปี 2555 และเสร็จสมบูรณ์ในปี 2561 ^{[ 7 ]}งานจัดสวนบางส่วนยังคงเหลืออยู่ ซึ่งจะเริ่มในฤดูใบไม้ร่วงปี 2561 ในฐานะโครงการแยกต่างหาก โดยก่อสร้างแยกต่างหากเพื่อความสวยงามของเส้นทางผ่านเมือง

ทางเหนือของ Blowing Rock ทางหลวง US 321 เป็นทางหลวงสี่เลนอยู่แล้วจนถึงถนน King Street ในBooneดังนั้น US 321 จึงเป็นทางหลวงสี่เลนจากเส้นแบ่งเขตแดนรัฐเซาท์แคโรไลนาไปจนถึงใจกลางเมือง Boone ปัจจุบันUS 321 บรรจบกับUS 421ที่ถนน King Street และทับซ้อนกันบนถนน King Street เพื่อออกจากเมืองไปทางทิศตะวันตก โครงการ R-2615 ของ NCDOT เสนอให้ขยายทางหลวง US 321/421 จากจุดบรรจบนี้ไปยังจุดบรรจบใกล้Vilasแม้ว่าโครงการนี้ยังไม่ได้รับการจัดสรรงบประมาณ^{[ 8 ]}มีการศึกษาความเป็นไปได้ (FS-0511A) ที่กำลังดำเนินการอยู่เพื่อตรวจสอบความเป็นไปได้ในการขยาย US 321 จากจุดบรรจบใกล้ Vilas ไปจนถึงเส้นแบ่งเขตแดนรัฐเทนเนสซี หากโครงการทั้งสองนี้เสร็จสมบูรณ์ US 321 จะเป็นทางหลวงสี่เลนตลอดทั้งรัฐ

เมื่อเข้าสู่รัฐเทนเนสซี ทางหลวงหมายเลข US 321 จะเข้าสู่ป่าสงวนแห่งชาติเชอโรคีและมุ่งหน้าไปทางทิศตะวันตกผ่านหุบเขาที่ขรุขระระหว่างภูเขาพอนด์ทางทิศใต้และทะเลสาบวาตาอูกาทางทิศเหนือ ทางหลวงสายนี้ผ่านที่ตั้งแคมป์ จุดปล่อยเรือ และพื้นที่พักผ่อนหย่อนใจอื่นๆ ที่เกี่ยวข้องกับทะเลสาบมากมาย ขณะที่คดเคี้ยวไปตามชายฝั่งของทะเลสาบ ทางใต้ของเมืองบัตเลอร์ทางหลวงจะบรรจบกับ ทางหลวง หมายเลข SR 67ซึ่งเข้ามาจาก พื้นที่ เมาน์เทนซิตี้ ทางทิศ ตะวันออกเฉียงเหนือ เส้นทางเดินป่า แอปปาเลเชียนตัดกับทางหลวงหมายเลข US 321 ที่จุดตัดกับถนนชูคแกป ก่อนที่ทางหลวงจะออกจากป่าสงวนแห่งชาติ ที่เมืองแฮมป์ตัน ทางหลวงหมายเลข US 321 ตัดกับทางหลวงหมายเลข US 19Eและทางหลวงทั้งสองสายวิ่งคู่ขนานไปทางเหนือสู่เมืองเอลิซาเบธตัน

ทางหลวงหมายเลข US 321 เปลี่ยนทิศทางใน Elizabethton: ถนนถูกกำหนดให้เป็นเส้นทางลงใต้ในทั้งสองทิศทางเมื่อขับออกจากจุดตัดกับทางหลวงหมายเลข US 19E ^{[ 9 ]}ทางหลวงนี้เชื่อมต่อกับทางหลวงหมายเลข US 11E ในบางส่วนของ เขต WashingtonและGreeneในGreenevilleทางหลวงยังคงมุ่งหน้าไปทางใต้เข้าสู่เขต Cockeที่เส้นแบ่งเขต Cocke-Greene ทางหลวงหมายเลข US 321 กลายเป็นทางหลวงสี่เลนแบบแบ่งช่องจราจรและเลี่ยงเมือง Parrottsvilleส่วนที่เป็นสี่เลนจะสิ้นสุดลงก่อนถึงจุดตัดของทางหลวงหมายเลข US 321 กับทางหลวงหมายเลข SR 160และข้ามทางหลวงหมายเลขI-40ที่Newport

ถนน US 321 ช่วงจากนิวพอร์ตลงใต้ไปยังคอสบีและตะวันตกเฉียงใต้ผ่านพิตต์แมนเซ็นเตอร์ไปยังแกตลินเบิร์กขนานไปกับเขตแดนทางเหนือของอุทยานแห่งชาติเกรตสโมกี้เมาน์เทนส์และมีทิวทัศน์สวยงามมาก จากจุดระหว่างนิวพอร์ตและคอสบี ไปจนถึงจุดตัดกับถนนลิตเติลริเวอร์ ถนนสาย นี้จะวิ่งคู่ขนานกับทางหลวงรัฐ 73ใน เมือง พิจอนฟอร์จ ถนน US 321 วิ่งคู่ขนานกับถนน US 441 / เกรตสโมกี้เมาน์เทนส์พาร์คเวย์ เป็นถนนหลายเลนแบ่งช่องจราจรที่มีปริมาณรถหนาแน่น ซึ่งเป็นเส้นทางหลักของเมือง โดยมีโรงแรม ศูนย์การค้า และสถานบันเทิงเรียงรายอยู่สองข้างทาง เมื่อเลี้ยวไปทางตะวันตกเฉียงใต้ของพิจอนฟอร์จ ทางหลวงจะมีลักษณะเป็นชนบทมากขึ้นเมื่อผ่านหุบเขาเวียร์ ส และแคบลงเหลือสองเลนจนถึงจุดตัดกับทางหลวงรัฐ 73 ซีนิก (ถนนลิตเติลริเวอร์) ที่ ทางเข้า ทาวน์เซนด์ของอุทยาน จากจุดตัดนี้ไปจนถึงจุดสิ้นสุด ถนนสายนี้จะวิ่งคู่ขนานกับทางหลวงรัฐ 73 ยกเว้น ช่วง 3 ไมล์ (4.8 กิโลเมตร)ระหว่างทาวน์เซนด์และแมรีวิลล์ส่วนที่เหลือของทางหลวงใน เขต บลอนท์เคาน์ตีนั้นมีอย่างน้อยสี่เลนและโดยทั่วไปเป็นทางหลวงแบบแบ่งช่องจราจร เมื่อทางหลวงถึงเขื่อนฟอร์ตลูเดนในเขตลูเดนเคาน์ตีมันจะข้ามแม่น้ำเทนเนสซีโดยใช้สะพานที่สร้างเสร็จในปี 2017 ทางตะวันออกเฉียงใต้ของเขื่อน จากนั้นตัดกับทางหลวงหมายเลข 11 ของสหรัฐฯในเมืองเลอนัวร์ซิตี้ทางหลวงหมายเลข 321 ของสหรัฐฯ มีเส้นทางสวนทางกับทางหลวงหมายเลข 95 ของรัฐราชสถาน ตั้งแต่จุดที่อยู่ทางใต้ของเมืองเลอนัวร์ซิตี้หลายไมล์ (ใกล้กับกรีนแบ็ก ) ไปจนถึงจุดสิ้นสุดที่ ทางหลวง หมายเลข 40ของรัฐราชสถาน ในส่วนเหนือของเมืองเลอนัวร์ซิตี้ ทางหลวงหมายเลข 321 ของสหรัฐฯ ตัดกับทางหลวงหมายเลข 75 ของ รัฐราชสถาน และทางหลวงหมายเลข 70 ของสหรัฐฯก่อนที่จะถึงทางหลวงหมายเลข 40 ของรัฐราชสถาน เลยจากทางหลวงหมายเลข 40 ของรัฐราชสถานไปแล้ว ถนนจะมุ่งหน้าไปทางเหนือสู่โอ๊คริดจ์ในฐานะทางหลวงหมายเลข 95 ของรัฐราชสถานแบบสองเลน 

ทางหลวงหมายเลข US 321 เป็นถนนสี่เลนกึ่งแบ่งช่องจราจร จากทางหลวงหมายเลข I-40 และ I-75 ไปยังอุทยานแห่งชาติเกรตสโมกี้เมาน์เทนส์ ยกเว้นช่วง3 ไมล์ (4.8 กิโลเมตร)ใกล้กับเมืองวอลแลนด์ 

ทางหลวงหมายเลข 17 ของรัฐนอร์ทแคโรไลนา ( NC  17 ) เป็นทางหลวงของรัฐสายเดิมที่ตัดผ่านจากฮิคกอรีไปยังบูเน ผ่านแกรนิตฟอลส์ฮัดสันเลอนัวร์และโบลวิงร็อกในปี 1930 ได้มีการขยายไปทางใต้บนเส้นทางหลักใหม่ไปยังNC  113ที่โพรปสต์ครอสโรดส์ และในปีเดียวกันนั้นเอง ทางหลวงหมายเลข 321 ของสหรัฐฯ ก็ได้ถูกสร้างขึ้นในรัฐและทับซ้อนกับ NC  17 ระหว่างฮิคกอรีและบูเน^{[ 11 ]} ในปี 1934 NC  17 ถูกยกเลิก โดย US  321 รับช่วงทางเหนือของฮิคกอรีทั้งหมด และNC  96รับช่วงทางใต้ทั้งหมด^{[ 12 ]}

ทางหลวงหมายเลข 155 ของรัฐนอร์ทแคโรไลนา ( NC  155 ) ก่อตั้งขึ้นในปี 1994 โดยใช้เส้นทางเดิมของทางหลวง หมายเลข 321 ของสหรัฐอเมริกา (US 321) ซึ่งถูกย้ายไปอยู่บนทางหลวงสี่เลนสายใหม่ที่มีการควบคุมการเข้าออก [ ^{14 ] จาก} NC 275  / NC 279  ในเมืองดัลลัส ทางหลวงสายนี้วิ่งขึ้นเหนือผ่านเมืองไฮโชลส์ไปยังเมืองลินคอล์นตัน โดยใช้เส้นทางร่วมกับ NC  150เป็นระยะสั้นๆขณะที่เลี่ยงใจกลางเมืองลินคอล์นตัน จากนั้นจึงวิ่งขึ้นเหนือไปบรรจบกับทางหลวง หมายเลข 321 หลัก ทางใต้ของ เมือง เมเดน และ วิ่งร่วมกันต่อไปผ่านเมืองนิวตันและสุดท้ายที่เมืองโคโนเวอร์ ซึ่งสิ้นสุดที่ ทางหลวง หมายเลข 70 ของสหรัฐอเมริกา ในปี 1999 ส่วนที่เหลือของ ทางหลวงหมายเลข 321 ของสหรัฐอเมริกาถูกย้ายไปอยู่บนทางเลี่ยงเมืองสายใหม่ทางตะวันตกของเมืองนิวตันและโคโนเวอร์ ในเวลาเดียวกัน NC  155 ก็ถูกยกเลิกและรวมเข้ากับทางหลวงหมายเลข 321 ของสหรัฐอเมริกา (US 321 Business) ^{[ 15 ]}

ทางหลวงหมายเลข 603 ของรัฐนอร์ทแคโรไลนา (NC 603) ก่อตั้งขึ้นในปี 1931 และถูกยกเลิกการใช้งานในปี 1963 ^{[ 16 ]}

เส้นทางธุรกิจ US Route  321 ( US  321 Bus. ) เป็นเส้นทางธุรกิจของ US 321 ระยะทาง 4.350 ไมล์ (7.001 กม.)ซึ่งอยู่ในWinnsboro MillsและWinnsboroโดยผ่านถนน Columbia Road และถนน Congress Street ^{[ 18 ]}เส้นทางนี้ก่อตั้งขึ้นราวปี 1951 หรือ 1952 เมื่อเส้นทางหลักของ US 321 ถูกเปลี่ยนเส้นทางไปทางทิศตะวันตก โดยเลี่ยงเมือง Winnsboro   

เส้นทางธุรกิจ US Route  321 ( US  321 Bus. ) เป็นเส้นทางธุรกิจของ US 321 ในเมืองเชสเตอร์ระยะทาง 3.670 ไมล์ (5.906 กม.)โดยตัดผ่านใจกลางเมืองเชสเตอร์ ผ่านถนนโคลัมเบียและถนนเซ็นเตอร์^{[ 20 ]}เส้นทางนี้ถูกสร้างขึ้นระหว่างปี 1962 ถึง 1964 เมื่อเส้นทางหลัก US 321 ถูกเปลี่ยนเส้นทางไปทางทิศตะวันตก เลี่ยงเมืองเชสเตอร์   

เส้นทางธุรกิจ US Route  321 ( US  321 Bus. ) เป็นเส้นทางธุรกิจของ US 321 ในเมืองยอร์กระยะทาง 2.500 ไมล์ (4.023 กม.)โดยใช้ถนน Congress Street และถนน Kings Mountain Street ^{[ 22 ]}เส้นทางนี้ก่อตั้งขึ้นราวปี 1957–1958 เมื่อเส้นทางหลัก ของ US 321 ถูกเปลี่ยนเส้นทางไปทางทิศตะวันตก โดยเลี่ยงเมืองย อร์ก   

ทางหลวงหมายเลข 321 ธุรกิจของสหรัฐอเมริกา ( US  321 Bus ) ก่อตั้งขึ้นในเดือนมิถุนายน พ.ศ. 2542 โดยเป็นการเปลี่ยนหมายเลขทางหลวงหมายเลข 155 ของรัฐนอร์ทแคโรไลนาทั้งหมด และส่วนหนึ่งของทางหลวง หมายเลข 321 สายหลักในเขตเคาน์ตีคา ตาบา ทางหลวงสายนี้ ทอดยาว37.2 ไมล์ (59.9 กิโลเมตร)ผ่าน เขตเคาน์ตีแกสตัน ลินคอล์น และคาตาบา เชื่อมต่อเมืองและชุมชนต่างๆ ได้แก่ ดัลลัสไฮโชลส์ลินคอล์นตันเมเดนนิวตันโคโนเวอร์และฮิคกอรี ทางหลวงสายนี้ใช้เส้นทางเดิมของทางหลวงหมายเลข 321 ที่มีอยู่ก่อนปี พ.ศ. 2537 ^{[ 15 ]}  

ทางหลวงหมายเลข 321 สายสำรอง ( US  321A ) ก่อตั้งขึ้นในปี 1956 เมื่อทางหลวง หมายเลข 321 สายหลักถูกสร้างเป็นทางเลี่ยงเมืองใหม่ทางตะวันออกของใจกลางเมืองลินคอล์นตัน โดยวิ่งผ่านถนนแอสเพนและอ้อมศาลแพ่งประจำเทศมณฑลลินคอล์นบนถนนคอร์ทสแควร์ไดรฟ์ ในปี 1960 ทางหลวงสายนี้ถูกยกเลิก และถนนแอสเพนกลายเป็นถนนรอง

ทางหลวงหมายเลข 321 สายสำรองของสหรัฐอเมริกา ( US  321A ) ก่อตั้งขึ้นในปี 1948 โดยเป็นการสลับหมายเลขกับทางหลวง หมายเลข 321 ของสหรัฐอเมริกาที่ผ่านใจกลางเมืองเลอนัวร์ ในปี 1957 ทางหลวง หมายเลข 321A ได้ขยายไปทางใต้ แทนที่ทางหลวงหมายเลข 321 สายหลักที่ผ่านเมืองแกรนิตฟอลส์และฮัดสันและสิ้นสุดที่จุดสิ้นสุดทางใต้ในปัจจุบันทางเหนือของแม่น้ำคาตาบาในเดือนมิถุนายน ปี 1964 ทางหลวงหมายเลข 321A ได้กำหนดให้เป็นทางเดียวผ่านใจกลางเมืองเลอนัวร์ โดยเส้นทางขาขึ้นยังคงวิ่งไปตามถนนมัลเบอร์รีและถนนเวสต์ ส่วนเส้นทางขาลงเปลี่ยนเส้นทางไปตามถนนเมนและถนนคอลเลจ ในเดือนกันยายน ปี 2006 ทางหลวงหมายเลข 321A ได้เปลี่ยนเส้นทางไปยังจุดสิ้นสุดทางเหนือในปัจจุบัน ซึ่งอยู่ทางใต้ของใจกลางเมืองเลอนัวร์ ผ่านถนนแมคลีนไดรฟ์ เส้นทางเดิมที่ผ่านใจกลางเมืองเลอนัวร์ยังคงใช้เส้นทางของ ทางหลวงหมายเลข 90 ของ รัฐนอร์ท  แคโรไลนา จนถึงปี 2012 เมื่อเส้นทางนี้ก็ถูกเปลี่ยนเส้นทางเช่นกัน ปัจจุบันเส้นทางเดิมอยู่ภายใต้การควบคุมของเมือง^{[ 26 ] [ 27 ] [ 28 ]}

ถนน US 321A ที่ตัดผ่าน Granite Falls, Sawmills , Hudson และLenoir นั้นแทบไม่มีการเปลี่ยนแปลงเลยตลอดหลายปีที่ผ่านมา ส่วนใหญ่เป็นทางหลวงสองเลน ขนานไปกับทางรถไฟสายสั้น และเชื่อมต่อกับโรงงานและย่านใจกลางเมืองหลายแห่ง

ทางหลวงหมายเลข 321 สายสำรองของสหรัฐอเมริกา ( US  321A ) ก่อตั้งขึ้นในปี 1941 เป็นเส้นทางสำรองใหม่ที่เลี่ยงเมืองเลอนัวร์ ต่อมาในปี 1948 ได้ถูกแทนที่ด้วยทางหลวงหมายเลข 321 สายหลัก

ทางหลวงหมายเลข 321 ธุรกิจ ( US  321 Bus ) ก่อตั้งขึ้นในปี 1960 เพื่อปรับปรุงถนนรองที่ตัดผ่านใจกลางเมืองโบลวิงร็อก ซึ่งเดิมเป็นส่วนหนึ่งของทางหลวงหลักหมายเลข 321 จนถึงประมาณปี 1954 เมื่อถูกย้ายไปอยู่ทางเลี่ยงเมืองสายใหม่ทางทิศตะวันออก ทางหลวงสายนี้ตัดผ่านถนนเมนสตรีทและใช้เส้นทางร่วมกับทางหลวงหมายเลข 221เป็นระยะ ทาง 0.8 ไมล์ (1.3 กิโลเมตร)ในส่วนทางเหนือ 

ทางหลวงหมายเลข 321 สำหรับรถบรรทุกของสหรัฐอเมริกา ( US  321 Truck ) จะเปลี่ยนเส้นทางให้รถบรรทุกที่เดินทางผ่านพื้นที่นี้ไปทางใต้และอ้อมตัวเมืองบูเน โดยใช้เส้นทางNC  105และทางหลวงหมายเลข 105 ทางเลี่ยงเมืองของ NC (SR-1107) เส้นทางนี้ทับซ้อนกับทางหลวงหมายเลข 221 สำหรับรถบรรทุกของสหรัฐอเมริกา  บางส่วน และทับซ้อนกับทางหลวงหมายเลข 421 สำหรับรถบรรทุกของสหรัฐอเมริกา โดยสมบูรณ์

เส้นทาง US Route 321 Truck ( US 321 Truck ) เป็นเส้นทางเบี่ยงสำหรับรถบรรทุกที่เดินทางลงใต้บนทางหลวง US 321 เพื่อหลีกเลี่ยงใจกลางเมือง โดยใช้เส้นทางร่วมกับทางหลวงUS 11Eและทางหลวง SR 70เส้นทางเริ่มต้นที่ US 11E/US 321 และสิ้นสุดที่ US 321/SR 70 ซึ่งอยู่ห่างออกไป3.6 ไมล์ (5.8 กิโลเมตร) 

เส้นทางทั้งหมดอยู่ใน เมือง กรีนวิลล์เคาน์ตีกรีน

มิ	กม.	จุดหมายปลายทาง	หมายเหตุ
0.0	0.0	เส้นทาง US  321  / SR  35 (ถนนเวสต์เมน)  / SR  70ใต้ (ทางหลวงแอชวิลล์)  / SR  107 (ทางหลวงแอชวิลล์ / ถนนเวสต์เมน)  – กรีนวิลล์ , พาร์รอตต์สวิลล์, นิวพอร์ต, เดลริโอ,แอชวิลล์	จุดสิ้นสุดทางใต้ของทางหลวง US 321 Truck และจุดตัดกับทางหลวง SR 70
1.0	1.6	เส้นทาง US  11E Bus.ไปทางเหนือ (ถนน West Summer)  / SR  350ไปทางใต้ (ถนน West Summer)  – ตัวเมือง Greeneville	เริ่มต้นเส้นทาง US 11E Business ที่เชื่อมต่อกัน; จุดสิ้นสุดทางเหนือของ SR 350
1.2	1.9	ทางหลวง หมายเลข 11E ของสหรัฐฯมุ่งหน้าไปทางใต้ / ทางหลวงหมายเลข 34 ของรัฐเซาท์ แคโรไลนา มุ่งหน้าไปทางใต้ (ทางหลวงเวสต์แอนดรูว์ จอห์นสัน)  / ถนนบลูสปริงส์พาร์คเวย์ – มอสไฮม์ , บูลส์แกป , มอร์ริสทาวน์	จุดสิ้นสุดทางใต้ของทางหลวง US 11E Business; จุดเริ่มต้นที่ทางหลวง US 11E ทับซ้อนกับทางหลวง SR 34
1.7	2.7	ทางหลวงหมายเลข 70เหนือ (เส้นทาง Lonesome Pine Trail)  – โรมีโอ , โรเจอร์สวิลล์	สิ้นสุดส่วนที่ทับซ้อนกันของ SR 70
2.0	3.2	ทางหลวงหมายเลข 172เหนือ (ถนนเบลีย์ตัน)  / ถนนไวท์เฮาส์ – เบลีย์ตันสนามบิน	จุดสิ้นสุดทางใต้ของทางหลวงหมายเลข 172; ทางแยกต่างระดับ
3.4	5.5	เส้นทาง US  11Eเหนือ / US  321 (ถนน North Main Street / ทางหลวง East Andrew Johnson Highway)  / SR  34เหนือ (ทางหลวง East Andrew Johnson Highway)  / SR  35ใต้ (ถนน North Main Street)  – Jonesborough , Johnson City , Newport , Downtown Greeneville	สิ้นสุด US 321 รถบรรทุก
3.6	5.8	ทางหลวงหมายเลข 93เหนือ (ทางหลวงคิงส์พอร์ต)  – ฟอลล์แบรนช์ , คิงส์พอร์ต	จุดสิ้นสุดทางใต้ของทางหลวงหมายเลข 93
1.000  ไมล์ = 1.609  กม.; 1.000  กม. = 0.621  ไมล์       จุดสิ้นสุดการทำงานพร้อมกัน